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表面活性蛋白A（surfactant proteins，SP-A）和表面活性蛋白D（surfactant proteins，SP-D）对肺部的发育、成熟起到重要作用。SP-A和SP-D基因的表达量与呼吸系统免疫防御息息相关，对肺部的异常病变具有指示作用，所以可以作为多种肺部疾病的生物标记。为检测体内SP-A/SP-D基因，本研究建立了两种检测方法：即荧光定量PCR方法和纳米金PCR方法，并且验证这两种方法的特异性及灵敏性。根据猪SP-A基因序列（NM214265.1）和猪SP-D基因序列（NM214110）设计特异性引物，将SP-A的CDS区（750bp）和SP-D的CDS区（1137bp）分别链接至PMD-18T载体，构建了猪SP-A基因和SP-D基因CDS区全序列重组质粒PMD-SP-A和PMD-SP-D。设计并合成了特异性的引物和探针，以重组质粒为标准品，对探针、引物等浓度及退火温度进行优化，建立了猪SP-A/SP-D基因的TaqMan荧光定量PCR方法。实验结果显示：所建立荧光定量PCR检测方法为异性扩增；SP-A基因检测下限达到2.50×101copies/μl，而SP-D基因更是达到100copies/μl（约3copies）；批内及批间变异系数均小于2.5%；扩增效率在98%-108%之间。本实验建立的猪SP-A/SP-D基因TaqMan荧光定量PCR方法敏感性高、重复性好、特异性强，可以用于猪SP-A/SP-D基因的定量检测。沿用荧光定量PCR方法的特异性引物，以SP-A/SP-D重组质粒为模板，优化反应条件，建立了纳米金PCR（Nano PCR）方法，并对其灵敏度进行了测定。由于一些研究推测，纳米金能够替代PCR反应体系中的镁离子，为了检验这一推论，实验设计两组PCR反应体系，一组无镁离子，一组添加镁离子。实验结果表明：Nano PCR法亦能扩增得到与实验设计相符的特异性条带，灵敏度与荧光PCR方法相当，SP-A基因检测下限达2.53×101copies/μl，SP-D基因达到100copies/μl（约3copies）。在实验组中，无镁离子的实验组能灵敏地扩增出特异性条带，但添加镁离子的对照组检测灵敏度要更好，说明纳米金粒子可以起到反应体系中的镁离子的作用，而镁离子与纳米金粒子两种粒子对PCR反应效果的增强作是相对独立的，不是简单的替代关系。为了对比，本研究使用ExTaq酶，以重组质粒为模板，进行反应体系和反应条件优化，构建了SP-A/SP-D基因的普通PCR检测方法。用普通PCR方法检测SP-A/SP-D基因的灵敏度下限仅为104copies/μl，其灵敏度远小于荧光定量PCR方法和Nano PCR方法。对比实验证明，本研究所建立的两种检测方法比普通PCR检测效率要高。本研究创造性地为检测微量SP-A/SP-D基因提供了一套高效双保险检测方法。从理论上讲，探针法荧光定量PCR能准确定量检测目的基因，将这一方法应用到猪SP-A/SP-D基因的研究中，能够达到检测目的基因含量的要求，为这两种基因的后续研究奠定了基础。而NanoPCR是一种新兴的PCR方法，目前对于Nano PCR的研究仍然甚少，本实验为Nano PCR的广泛应用做了进一步探索，虽然Nano PCR方法不能准确检测出目的基因的含量，但其有着灵敏性高、特异性好的特点，而且成本较荧光PCR方法要小很多。从实际意义上讲，近些年对猪SP-A/SP-D基因的研究正在逐步深入，已经证实这两种基因对多种肺部疾病都有指示作用，但仍没有高灵敏度定量PCR检测方法出现，本研究所建立的两种检测SP-A/SP-D基因的新型方法，为研究多种肺部疾病的发生和发展提供了新的技术手段。