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胃肠道间质瘤(GIST)为最常见的胃肠道间叶来源肿瘤,KIT蛋白的表达为其最重要的病理特征,c-kit基因发生功能获得性突变,使KIT蛋白发生自主磷酸化而自动活化,进而激活下游细胞增殖信号,被认为是GIST的主要发病机制,而在GIST中是否存在另外的KIT蛋白激活途径却少有研究。Imatinib为小分子酪氨酸激酶抑制剂,能够通过抑制KIT蛋白磷酸化而有效抑制GIST的进展,目前将imatinib作为不可手术和晚期转移GIST病人的首选治疗已经达成共识。然而,临床上也有部分GIST病人出现对imatinib的原发或继发性耐药,发生耐药使imatinib对部分GIST病人的治疗无法取得更好的疗效,而imatinib的耐药机制至今尚未完全阐明。在GIST中广泛表达的KIT受体蛋白,正常情况下的活化需要其配体——干细胞因子(SCF)的参与,SCF/KIT通路的激活在正常造血、黑色素形成、消化道cajal细胞的分化等过程中均发挥重要作用,目前还有研究发现该通路的激活也参与多种肿瘤的增殖与进展,那么这种依赖配体SCF的KIT激活是否也参与了GIST细胞的增殖过程,是否在GIST细胞增殖和转移过程中发挥作用,SCF/KIT途径的激活是否与imatinib耐药有一定关系,迄今少有研究。因此,本课题旨在探讨GIST中是否存在配体依赖的SCF/KIT通路的激活,该通路的激活能否促进GIST细胞的增殖,以及该通路的激活与imatinib耐药是否相关。本课题采用免疫组织化学法和western blot检测GIST组织中SCF的表达情况,随后分析SCF的表达与GIST肿瘤增殖相关指标之间的关系；采用DNA直接测序法,检测GIST标本中c-kit基因的突变状态,结合SCF的表达情况,分析二者之间有无相关性；体外建立GIST原代细胞,采用CCK-8试剂和western blot分别检测给予SCF因子刺激后GIST细胞的增殖状态以及KIT蛋白的磷酸化水平,以此验证SCF能否在GIST细胞中发挥其激活受体的生物学功能；通过western blot检测经imatinib处理后的GIST细胞中SCF的表达水平有无改变,以及imatinib能否有效抑制SCF所导致的KIT磷酸化,从而探索imatinib耐药与SCF/KIT通路的激活有无关系。本课题的研究结果表明：SCF在GIST中的表达率为76%(52／68),其中还存在广泛的SCF和KIT的共表达(共表达率75%；51／68),结合临床病理因素分析表明,SCF表达与肿瘤病理性核分裂数和Ki-67增殖指数等肿瘤增殖相关指标明显相关,此结果提示GIST中存在SCF的自分泌,且SCF所发挥的生物学作用可能与肿瘤增殖活性相关；经DNA测序分析后证实,SCF的表达与c-kit基因突变状态并无明显相关性,因此可以推测依赖配体SCF的激活可能是GIST中KIT蛋白的另外一条独立激活途径；体外给予SCF因子刺激GIST原代细胞,结果表明SCF能够促进GIST原代细胞增殖,western blot检测进而证实,给予SCF因子刺激后,GIST原代细胞中KIT蛋白发生较强的磷酸化,上述结果提示SCF具有激活GIST中的KIT受体蛋白促进细胞增殖的生物学作用；为进一步阐明imatinib对SCF/KIT通路的影响,将GIST原代细胞与imatinib共同孵育,72小时后检测发现SCF的表达较前增强,同时western blot检测也显示,imatinib不能有效抑制SCF因子刺激后KIT蛋白所发生的磷酸化,因此该结果证实imatinib非但无法关闭配体依赖的信号通路,反而会导致SCF的表达反馈性增强。综上,本课题得出结论：配体依赖的SCF/KIT通路的激活能够促进GIST细胞的增殖,同时该通路的激活可能是导致imatinib发生耐药的重要原因之一。在GIST中,除突变导致非配体依赖的KIT蛋白磷酸化途径之外,同时还存在配体依赖的KIT蛋白的激活途径,同时抑制这两条通路可能可以更有效地阻止GIST细胞的增殖。本研究为深入研究胃肠道间质瘤的发生发展机制奠定了实验基础,也为进一步寻找新的靶向治疗药物提供了新的思路。