草坪是城市绿化的重要组成部分,其中双子叶草坪草,如白三叶（Trifoliumrepens）、红三叶（Trifolium pretense）、百脉根（Lotus corniculatus Linn）、马蹄金（Dichondra repens Forst.）等作为重要的观赏性草坪草在现代草坪建设中有着极为重要的应用价值,但是由于单一草种大面积种植、高水高肥的养护,使得草坪草极易受各种病虫害侵袭,其中病害包括白粉病、白绢病、萎蔫病等,虫害包括斜纹夜蛾、草地螟、叶蝉、蚜虫等。采用植物基因工程的方法可以对这些双子叶草坪草的抗性和品质进行改良。其中,农杆菌介导的转化方法是目前研究较透彻,较常规、较成熟的转化手段之一,具有操作简便、费用低廉、转化效率高等特点。本论文建立并优化了草坪草马蹄金、白三叶和红三叶的组织培养及植株再生体系,建立了农杆菌LBA4404介导的抗病基因SAP1基因和抗虫基因GNA基因对白三叶的遗传转化体系,获得了白三叶的转基因植株。主要研究结果如下:1.不同激素配比对马蹄金愈伤组织诱导影响不同。以马蹄金下胚轴、子叶和种子为外植体,愈伤组织诱导最佳激素浓度分别为:2,4-D 1mg/L+NAA0.5mg/L+KT 0.1mg/L、2,4-D 2mg/L+6-BA 0.1mg/L、2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L;不同外植体产生的愈伤组织的质量不同,以马蹄金下胚轴和初生子叶为外植体诱导的愈伤组织较为致密,优于以种子为外植体产生的愈伤组织。但是马蹄金的愈伤组织分化和植株再生较为困难。2.以白三叶吸胀子叶为外植体,在添加6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L的MS培养基上可分化出丛生芽,分化率为75.00%;丛生芽在原培养基上生根。以红三叶子叶为外植体,在添加6-BA 1 mg/L+NAA 0.05 mg/L+1mg/L KT的MS培养基上也可直接分化,分化率为73.75%,最佳生根培养基为MS+NAA 0.5 mg/L。3.选用白三叶吸胀子叶为外植体,将携带SAP1基因的农杆菌菌液离心后,去上清,并用无激素1/2MS液体培养基悬浮使OD₆₀₀≈0.2,侵染白三叶吸胀子叶35min;携带GNA基因的农杆菌菌液侵染外植体的最佳OD₆₀₀值约为0.3,侵染25min;共培养3天后,转入附加有45mg/L卡那霉素和400mg/L羧苄青霉素的再生培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L上选择培养28d后,子叶柄再生出抗性芽,转化率分别达到26.32%和28.21%。抗性芽在附加有30mg/L的卡那霉素和400mg/L羧苄青霉素的生根培养基上继续筛选,长出抗性根,形成完整的转化植株。4.转化植株经PCR检测证明SAP1和GNA基因已经成功转入白三叶基因组中。其中转SAP1基因的33株抗性植株中有28株为阳性,阳性率为84.84%;转GNA基因的31株抗性植株中有24为阳性,阳性率为77.42%。