论文部分内容阅读
目的:目的一:研究应力对大鼠BMSCs成骨、成脂肪分化的影响及分化过程中miR-140-5P表达水平的变化;目的二:研究miR-140-5P对应力作用下的大鼠BMSCs成骨、成脂肪分化的影响;目的三:研究牵张应力与miR-140-5P两者通过TGFβ 1/Smad2信号传导通路对大鼠BMSCs分化的调控作用。方法:第一步:分组诱导大鼠体外BMSCs成骨、成脂分化,对实验组予以加载牵张应力。诱导一定时间后检测成骨分化组成骨标志物的表达程度与成脂分化组成脂标志物的表达程度,同时PCR检测不同时期各组miR-140-5P的表达水平。第二步:构建miR-140-5P的过表达与低表达模型,对实验组继续予以加载应力,分组进行成骨、成脂肪诱导分化。诱导完成后分别用PCR、WB检测miR-140-5P过表达与低表达模型中成骨分化诱导组成骨标志物的表达水平与成脂分化诱导组成脂标志物的表达水平。第三步:miR-140-5P的过表达与低表达模型与应力组及无应力组交叉配对,检测当miR-140-5P表达水平与牵张应力均发生变化时,TGFβ 1/Smad2信号通路标志物表达水平的变化。结果:第一步结果:实验组中成骨诱导分化的BMSCs内成骨分化标志物表达水平最高;对照组中的成脂诱导分化的BMSCs内成脂分化标志物表达水平最高。成骨分化的BMSCs内miR-140-5P表达水平低于成脂肪分化的BMSCs,诱导成脂分化的第3天miR-140-5P表达水平最高,诱导成骨分化的第3天miR-140-5P的表达水平最低。第二步结果,实验组中miR-140-5P低表达的BMSCs成骨标志物表达水平最高;对照组中miR-140-5P过表达的BMSCs成脂标志物表达水平最高;第三步结果:miR-140-5P可以通过下调TGFβ R1来抑制TGFβ1/Smad2信号传导通路进而促进BMSCs成脂标志物的表达,抑制BMSCs成骨标志物的表达,而牵张应力可以通过上调TGFβ 1来上调TGFβ1/Smad2信号传导通路进而抑制BMSCs成脂标志物的表达,促进BMSCs成骨标志物的表达。结论:牵张应力可以促进BMSCs成骨分化同时抑制成脂肪分化;成骨分化时miR-140-5P处于低表达状态,成脂肪分化时miR-140-5P处于高表达状态;mi R-140-5P高表达时可以促进BMSCs成脂肪分化,miR-140-5P低表达时可以促进BMSCs成骨分化;牵张应力与miR-140-5P均可以通过TCGFβ 1/Smad2信号传导通路对大鼠BMSCs的分化进行调控,并且二者对BMSCs分化的调控作用互相拮抗。