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目的:1.探讨HMGB1和RAGE是否参与URSA的发病,检测URSA患者外周血中HMGB1、RAGE、Th17和Treg细胞相关细胞因子表达水平,分析HMGB1和RAGE表达意义,及HMGB1与Th17、Treg细胞相关细胞因子之间的相关性。2.探索HMGB1对Th17、Treg细胞的调节作用,初步探讨HMGBI在URSA中可能作用机制。3.为URSA的发病机制提供新的理论依据和新思路,HMGB1有可能成为治疗URSA一个新的治疗靶点。方法:选取URSA早孕患者(42例)和正常早孕妇女(32例),分别为URSA早孕组和正常早孕组(NP组),收集所有研究对象的静脉血,采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测两组外周血中CD3+CD8-IL-17A+Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例;采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测两组外周血中HMGB1、RAGE、Th17细胞相关细胞因子(IL-17、1L-6)、Treg细胞相关细胞因子(TGF-β、IL-10)表达水平;用实时定量PCR检测HMGB1、RAGE、Foxp3、IL-17mRNA相对表达量;采用免疫磁珠法阳性分选CD4+T细胞进行体外培养,用100ng/ml浓度的重组人HMGB1刺激CD4+T细胞,再用FCM检测Th17和Treg细胞比例,用荧光定量PCR检测RAGEmRNA水平;采用GraphPad Prism5.0统计软件进行分析和制图。结果:1.ursa早孕组外周血中treg细胞比例低于正常早孕组(p<0.01),而th17细胞比例和th17/treg比值均高于正常早孕组(p<0.01)。2.ursa早孕组外周血hmgb1和rage浓度高于正常早孕组(p<0.05);与正常早孕组相比,ursa早孕组外周血il-17、il-6表达水平均增高(p<0.05),而tgf-β、il-10的表达水平均下降(p<0.05)。3.与正常早孕组相比,ursa早孕组外周血hmgb1、rage、il-17mrna表达量均增高(p<0.01),而foxp3mrna表达量下降(p<0.01);il-17/foxp3mrna比值显著上升,(p<0.01)。4.elisa检测结果相关性分析:hmgb1与rage表达水平呈正相关(r=0.70,p<0.01);ursa早孕组外周血hmgb1表达水平与il-17、il-6均呈正相关(r=0.79,r=0.84,p<0.01);而hmgb1表达水平与tgf-β、il-10均呈负相关(r=-0.90,r=-0.83,p<0.01)。5.体外重组人hmgb1刺激cd4+t细胞0h、6h、12h、24h后,0h组和6h组相比ragemrna表达无统计学差异(p>0.05),12h组和24h组ragemrna表达均高于0h组和6h组(p<0.01);0h组和6h组的th17、treg细胞比例和th17/treg比值相比无统计学差异(p>0.05),12h组和24h组th17细胞比例和th17/treg比值均高于0h组和6h组(p<0.01);12h组和24h组treg细胞比例均低于0h组和6h组(p<0.01)。结论:1.th17、treg细胞和th17/treg失衡与ursa有关。2.elisa检测结果表明hmgb1和rage与ursa发生发展有密切关系;th17和treg细胞相关细胞因子表达异常在ursa发病过程中发挥重要作用。3.基因水平证明hmgb1和rage与ursa发生发展有密切关系;th17和treg细胞关键细胞因子表达异常和il-17/foxp3失衡对ursa发生有重要作用。4.HMGB1高表达可能刺激RAGE表达增加;HMGB1可能通过促进Th17细胞重要炎症因子释放发挥促炎作用,通过下调Treg细胞免疫抑制因子减弱免疫抑制功能,从而影响URSA患者的Th17/Treg平衡。5.HMGB1呈时间依赖性上调RAGE表达,促进Th17细胞增殖和抑制Treg细胞分化,Th17/Treg平衡偏向Th17。HMGB1可能通过作用于Th17和Treg细胞,加重免疫炎症反应,减弱免疫抑制功能,使Th17/Treg平衡紊乱,打破母胎免疫耐受,最终导致母体免疫系统对胎儿的免疫排斥发生URSA。