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本研究旨在对类NADC30毒株进行病毒分离和全基因组测序,了解类NADC30毒株的分子特征和遗传进化情况,对类NADC30毒株进行深入的研究。同时对河南及周边地区流行的PRRSV毒株的ORF5及nsp2的基因变异情况进行检测,揭示PRRSV毒株的最新流行动态,以期为临床诊断、新疫苗的研发及抗病毒药物的研发提供科学的参考依据。一、PRRSV分型PCR方法的建立为了更快捷准确地对类NADC30毒株进行检测,本实验针对PRRSV类NADC30毒株、HP-PRRSV毒株、经典PRRSV毒株在nsp2区域分别缺失131个氨基酸、30个氨基酸无缺失这一分子特征,设计一对引物建立PCR方法对这3类毒株进行分型。本实验完成该RT-PCR方法的建立,及敏感性和特异性的验证,并对临床样品进行检测。实验结果证明:该方法能够同时将经典PRRSV毒株、HP-PRRSV毒株以及类NADC30毒株这三种类型的毒株进行区分,并具有良好的敏感性和特异性。二、对2016-2017年河南省及周边地区的PRRSV的分子检测,及ORF5、nsp2基因的变异分析本研究对756份临床样品进行RT-PCR检测,共检出阳性样品139份,阳性率18.4%,扩增得到42个nsp2序列和50个GP5序列,遗传进化表明,河南地区的流行株主要为美洲型毒株,其中有20份与NADC30毒株高度同源,且在nsp2区域有131个氨基酸的不连续缺失。其余的22份序列与HP-PRRSV高度同源,均在nsp2区域有30个氨基酸的不连续缺失。与2016年相比,2017年河南及周边地区类NADC30毒株的比例急剧增加,且PRRSV流行毒株的GP5和nsp2均发生了很大的变异,因此有必要对PRRSV流行和变异进行持续的检测,以期为临床诊断和疫病防控提供科学的参考依据。三、20株类NADC30样品的分离与鉴定对检测为类NADC30的样品接种PAM细胞进行病毒分离,共分离获得20株类NADC30毒株,RT-PCR鉴定结果表明分离到的毒株均能扩增出目的条带,IPMA鉴定结果表明分离到的样品均PRRSV阳性。四、PRRSV类NADC30毒株全基因序列测定及分析本研究获得了20株类NADC30毒株的全基因序列,并对其进行遗传进化分析及同源性分析。分析结果显示:20株全基因组核苷酸之间的同源性86.8%-93.8%,与VR2332的同源性为85.1%-88.2%,与CH-1a的同源性为84.2%-90.8%,与NADC30的同源性为88.3%-96.7%,与JXA1的同源性为83.5%-93.0%。遗传进化表明,19株毒株属于第5亚型,1株属于第4亚型。对20株毒株进行重组分析结果表明19株发生重组,1株未发生重组,重组位置多发生在非结构蛋白,重组毒株以HP-PRRSV毒株为主。本研究为深入研究类NADC30毒株在中国的变异和遗传进化提供了参考。