【摘 要】
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目的描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对miR-615-5p表达抑制所起的作用。观察DNA甲基转移酶抑制剂对miR-615-5p在胰腺癌细胞株中甲基化状态和表达的影响。方法甲基化芯片筛
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目的描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对miR-615-5p表达抑制所起的作用。观察DNA甲基转移酶抑制剂对miR-615-5p在胰腺癌细胞株中甲基化状态和表达的影响。方法甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株PANC-1中存在异常甲基化的5个miRNA(miR-615-5p、miR-663、miR-663b、miR-675和miR-1826)。在对miR-615-5p的进一步研究中证实了它在胰腺癌细胞株及胰腺组织标本中的作用。通过甲基化特异性聚合酶链反应和重亚硫酸盐测序聚合酶链反应检测了miR-615-5p的表达与启动子区甲基化状态的相关性。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine, 5-Aza-CdR)处理体外培养的胰腺癌细胞株PANC-1、SW1990、BXPC-3和CFPAC-1。运用RT-PCR定量检测用药前后miR-615-5p表达量的差异。结果miR-615-5p的甲基化水平在胰腺癌细胞株PANC-1、SW1990和CFPAC-1中明显高于胰腺癌细胞株BXPC-3中的水平。通过甲基化特异性聚合酶链反应和重亚硫酸盐测序聚合酶链反应的检测发现miR-615-5p的表达与其启动子区甲基化水平呈负向关系。用去甲基化药物5-Aza-CdR处理胰腺癌细胞株PANC-1、SW1990和CFPAC-1可以发现miR-615-5p甲基化水平的降低同时伴随着表达的重新激活。结论本研究证实了miR-615-5p启动子区的异常甲基化与其在胰腺癌细胞株中的表达沉默密切相关,同时对胰腺癌的诊断和治疗提供新的靶点。
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