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目的:1.评估正常膀胱上皮细胞和不同恶性程度的膀胱癌细胞株SENP2的表达水平以及SENP2对膀胱癌细胞EMT的影响,探讨其作为治疗靶点的临床价值。2.探讨SENP2通过TGF-β/Smad信号通路抑制膀胱癌细胞EMT的具体作用机制,从而为SENP2作为治疗靶点提供更加充分的依据。3.研究miR-495在膀胱癌发生发展中的作用及作用的具体机制,并研究接受miR-495抑制作用的具体靶基因,为进一步的临床治疗提供理论依据。方法:1.（1）qRT-PCR检测非浸润性膀胱尿路上皮癌细胞株RT4、DSH1以及浸润性尿路上皮癌细胞株TCCSUP、T24细胞株的SENP2基因mRNA表达水平;（2）qRT-PCR检测非浸润性膀胱癌细胞RT4、DSH1和浸润性膀胱癌细胞株TCCSUP、T24的E-cadherin的mRNA水平,并分析其表达和SENP2的关系;（3）SENP2高表达和siRNA沉默差异表达状态下,检测膀胱癌细胞E-cadherin、N-cadherin和纤维连接蛋白的mRNA和蛋白水平表达的差异。2.（1）Western blot检测不同SENP2表达状态下TGF-β1下游信号Smad2/3磷酸化的水平;（2）双荧光素酶报告基因系统检测膀胱癌细胞对于TGF-β1的摄取能力:（3）qRT-PCR检测不同SENP2表达状态下膀胱癌细胞和TGF-β1共培养后不同时相膀胱癌细胞E-cadherin的mRNA表达情况;（4）Transwell检测不同SENP2表达状态在不同TGF-β1水平干预下对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。3.（1）qRT-PCR检测膀胱癌细胞株J82、T24、UMUC3和TCCSUP和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1的miR-495的表达差异;（2）BrdU检测过表达miR-495抑制miR-495对于膀胱癌细胞株增殖能力的影响;（3）Transwell检测不同miR-495表达状态对膀胱癌细胞侵袭能力的影响;（4）双荧光素酶报告基因检测miR495对于PTEN基因mRNA的3’-UTR的结合能力;（5）Western blot检测不同miR-495表达状态对于PTEN基因蛋白水平表达的影响。结果:1.（1）膀胱癌细胞株SENP2的mRNA表达明显低于正常膀胱尿路上皮细胞,且膀胱浸润性尿路上皮癌细胞株SENP2的mRNA表达明显低于膀胱非浸润性尿路上皮癌细胞株;（2）膀胱癌细胞株E-cadherin的mRNA表达水平明显低于正常膀胱尿路上皮细胞,其表达水平和SENP2正相关;（3）T24细胞内SENP2过表达后,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均较对照组明显增加,而N-cadherin和纤维连接蛋白的mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降;RT4细胞内SENP2沉默表达后,E-cadherin的mRNA和蛋白表达较对照组明显减少,而N-cadherin和纤维连接蛋白的mRNA和蛋白较对照组明显增加。2.（1）TGF-βl能够显著提高T24和RT4细胞Smad2/3蛋白的磷酸化水平,而高表达SENP2能够明显抑制Smad2/3的磷酸化,从而抑制了 TGF-β/Smad信号通路。（2）在高表达SENP2的T24细胞和RT4细胞经过TGF-βl共培养后,其细胞内TGF-βl的含量明显低于低SENP2表达和高表达SENP2-mut的T24细胞和RT4细胞。（3）T24细胞和RT4细胞经过TGF-βl共培养后,高表达SENP2的T24细胞和RT4细胞内的E-钙粘蛋白表达量均高于低表达SENP2对照组。（4）高表达SENP2能够明显减弱T24细胞的侵袭能力,高表达SENP2能够逆转TGF-βl共培养提高的T24细胞的侵袭能力。3.（1）J82、T24、UMUC3、TCCSUP4种膀胱癌细胞株miR-495的表达均高于正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1;（2）过表达miR-495能够显著提高J82和T24膀胱癌细胞的增殖能力,而抑制miR-495表达能够抑制上述两种膀胱癌细胞的增值能力;（3）过表达miR-495能够提高J82和T24两种膀胱癌细胞的侵袭能力,而敲低miR-495能够抑制J82和T24两种膀胱癌细胞的侵袭能力;（4）相比于对照组,miR-495能够显著降低wt-PTEN-3’-UTR-βGL3的荧光活性,但不能降低mut-PTEN-3’-UTR-βGL3的荧光活性;（5）miR-495能够抑制J82和T24两种膀胱癌细胞内PTEN蛋白的表达。结论:1.膀胱尿路上皮癌细胞株的SENP2的表达量较正常膀胱上皮细胞明显降低,且与其恶性程度呈现负性相关;SENP2通过抑制膀胱癌的EMT水平,抑制了膀胱癌的发生发展。2.SENP2通过去SUMO化抑制了膀胱癌细胞TGF-β/Smad信号通路从而抑制TGF-βl诱导的EMT作用,抑制了膀胱癌细胞的侵袭。3.膀胱尿路上皮癌细胞株的miR-495的表达明显高于正常膀胱上皮细胞,miR-495能够通过抑制抑癌基因PTEN的表达,促进了膀胱癌的发生发展,为进一步改善膀胱癌的早期诊断和治疗提供了新的靶点。