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目的：人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，RSV)广泛分布于世界各地，是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚无特异性防治方法，世界卫生组织将发展RSV疫苗列为最优先发展的疫苗项目之一。RSV的11种蛋白中，包膜黏附糖蛋白(attachment glycoprotein，G)是中和抗原，免疫动物后，可以产生具有免疫保护作用的中和抗体，为新型疫苗候选抗原。本文利用同源重组方法，获得表达G蛋白的非复制型腺病毒重组体，为体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。 方法：本研究依据GenBank收录的A亚型RSV Long株碱基序列(收录号为M17212)，设计并合成一对特异性引物，利用RT-PCR技术，从感染RSV的HEp-2细胞中获得G基因片段，克隆到pGEM-T easy载体。经核酸序列分析正确后，进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)，得到重组载体pcDNA3.1(+)G，酶切鉴定后，脂质体法转染COS-7细胞，RT-PCR和Western blotting鉴定基因转录和蛋白表达。限制性内切酶从pcDNA3.1(+)G中切下目的基因G，亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV，获得重组穿梭质粒pSCG。酶切鉴定后，Pme Ⅰ线性化pSCG，利用电穿孔法转化技术，把线性pSCG转入含有pAdeasy-1的大肠杆菌E．coliBJ5183／p中进行同源重组，获得重组腺病毒质粒pFGAd／RSVG。酶切鉴定后，以Pac Ⅰ酶切pFGAd／RSVG，脂质体法转染293细胞。待出现典型的致细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)后，取细胞裂解液，以Western blotting鉴定目的基因表达。 结果：重组表达载体pcDNA3.1(+)G的限制性内切酶分析结果与预期一致，基因序列分析显示RSV G基因没有发生无义突变。转染COS-7细胞后，RT-PCR检测到