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目的及意义:铜绿假单胞菌是院内重要的机会致病菌。随着抗生素的不合理和大规模使用,造成铜绿假单胞菌的耐药率越来越高,尤其是碳青霉烯类耐药菌广泛流行。碳青霉烯类抗生素是一种β-内酰胺类抗生素,已有的研究表明,外膜蛋白Opr D、金属β-内酰胺酶和Amp C的过表达等机制都会引起碳青霉烯类抗性。本课题旨在研究院内铜绿假单胞菌流行情况和临床上铜绿假单胞菌opr D基因的多态性对碳青霉烯类抗性的影响。方法和结果:本研究收集院内160株铜绿假单胞菌,对每株细菌进行14种抗生素药敏试验;利用多位点序列分型方法对铜绿假单胞菌进行遗传差异分析;其中,MLST结果呈现高度的多样性:68个ST型被发现,其中有28个是首次发现的新ST型,这说明铜绿假单胞菌是以散发性为主进行传播,这种多样化也说明其较快的进化速度;耐药谱结合e BURST分析结果表明,相似的克隆群其抗菌谱并不一定相同,即同一个ST型可能对应的菌株的耐药谱大不相同。为探究opr D基因对碳青霉烯类抗性的影响,我们随机选取45株铜绿假单胞菌进行碳青霉烯类抗性研究,通过对该45株细菌的opr D基因序列进行测序分析,结果发现17株亚胺培南抗性和美罗培南抗性菌株中有14株都出现了提前终止的现象,他们的终止位点分别是nt 150(1株),624(4株),714(1株),912(1株),951(1株),1035(3株)和1302(3株),这造成了Opr D蛋白的不完整;另一方面,对亚胺培南和美罗培南均敏感菌株的15株中有9株,编码Opr D蛋白的Loop7和Loop8所对应的opr D基因序列均有一定程度的缺失,由此可推断,在我们的临床试验菌株中,Loop7和Loop8的缩短对碳青霉烯类药物的敏感性有关,而该机制是否为碳青霉烯类主要抗性机制,或是有其他机制共同作用还有待后期进一步研究证明,通过检测其金属β-内酰胺酶和Amp C酶的表达,发现只有2株是金属β-内酰胺酶阳性,没有任何菌株的Amp C酶是过量表达的,说明MBL和Amp C酶的过表达并不是样本菌株碳青霉烯类耐药的主要原因。结论:多位点序列分型揭示临床铜绿假单胞菌的遗传多样性及传播的发散性。opr D基因序列分析表明单纯的Opr D蛋白的缺失不能充分解释当前碳青霉烯类耐药的机制,需结合其他类机制进行进一步确证。此外,我们对临床铜绿假单胞菌opr D基因与碳青霉烯类耐药的相关分析工作可作为实验室标准菌株的一个补充。