蟾酥活性成分联合索拉非尼通过下调Akt/NF-κB信号途径抑制肝癌HepG2细胞生长

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhshp123456
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目的观察中药蟾酥活性成分蟾蜍灵和华蟾毒配基与分子靶向药物索拉非尼联合用药对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。并探究药物作用机理,为中药与临床抗癌药物的联合应用提供理论依据。方法以人肝癌HepG2细胞株为观察对象,具体实验方法如下:(1)MTT法检测肝癌HepG2细胞经蟾蜍灵、华蟾毒配基与索拉非尼单药以及蟾蜍灵、华蟾毒配基分别与索拉非尼联合用药作用12、24和48h后的增殖活性;(2)Hoechst 33342荧光染色检测药物作用后的细胞形态学变化;(3)流式细胞仪检测药物作用后细胞周期的变化;(4)Western blot检测肝癌HepG2细胞经蟾蜍灵、华蟾毒配基与索拉非尼单药以及蟾蜍灵、华蟾毒配基分别与索拉非尼联合用药作用后对Akt、p-Akt、IκB、NF-κBp65、p-NF-κBp65、Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase8、CyclinA、CDK2、PCNA等蛋白表达水平;(5)Western blot检测LY294002抑制Akt信号通路后华蟾毒配基与索拉非尼单药以及联合作用肝癌HepG2细胞后Akt和p-Akt蛋白表达水平。结果(1)MTT法显示,蟾蜍灵、华蟾毒配基与索拉非尼单药以及蟾蜍灵、华蟾毒配基分别与索拉非尼联合均能抑制HepG2细胞增殖,药物联合作用组的增殖抑制率明显高于相对应的单独药物作用组,且呈时间依赖性,用金氏公式得出在联合药物作用24h后具有协同作用(P<0.01)。(2)Hoechst 33342荧光染色检测结果显示,HepG2细胞经蟾蜍灵、华蟾毒配基与索拉非尼单药以及蟾蜍灵、华蟾毒配基分别与索拉非尼联合作用24h后,细胞呈现出核染色质凝集的凋亡形态特征,且药物联合作用组细胞凋亡形态更为明显。(3)流式细胞仪检测结果显示,索拉非尼作用组使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),蟾蜍灵、华蟾毒配基作用组使细胞周期阻滞于S期(P<0.05),药物联合作用组使细胞周期阻滞于S期(P<0.05)。(4)Western blot结果显示,蟾蜍灵、华蟾毒配基和索拉非尼单独药物作用组以及蟾蜍灵和华蟾毒配基分别与索拉非尼联合作用组Akt、NF-κB总蛋白表达均无明显变化(P>0.05)。p-Akt、p-NF-κBp65、Bcl-2、CyclinA、CDK2、PCNA蛋白表达水平逐渐降低,药物联合作用组比相对应的单独药物作用组降低更为明显(P<0.01)。IκB、Bax、Caspase3、Caspase8蛋白表达水平逐渐升高,药物联合作用组比相对应的单独药物作用组升高更加明显(P<0.01)。(5)Western blot结果显示,抑制剂LY294002将Akt信号通路抑制后,华蟾毒配基和索拉非尼单药以及联合作用肝癌HepG2细胞后Akt总蛋白表达均无明显变化(P>0.05),但是p-Akt蛋白表达水平降低,药物联合作用组比单独药物作用组降低更加明显(P<0.01)。结论蟾酥活性成分蟾蜍灵、华蟾毒配基与索拉非尼单药以及蟾蜍灵、华蟾毒配基分别与索拉非尼联合用药都能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡,并且联合后产生协同作用,其作用机制与抑制Akt/NF-κB信号通路的磷酸化作用有关。
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