番茄SlMYBL基因的表达分析及功能研究

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在植物生长发育过程中,有许多类转录因子参与并调控,而其中一类转录因子——MYB转录因子,是植物中一种比较重要的转录因子,它构成了植物体内最大转录因子家族之一。这类转录因子家族具有共同的特征,就是在它的N端含有大约52个氨基酸残基,而这些氨基酸残基组成了MYB结构域,且该MYB结构域具有高度的保守性。植物中MYB蛋白根据MYB域重复序列个数可分三个亚类:含有二个MYB重复序列的R2R3-MYB,含有三个相邻MYB重复序列的R1R2R3-MYB和其它一些通常只含有一个MYB重复序列的特异群体统称为MYB-like蛋白。MYB转录因子家族在植物体内,主要参与植物的生长发育和细胞代谢,但其中一部分也参与植物对外界的抗逆反应,在植物受到外界不良条件,比如高温、伤害、干旱等非生物胁迫时,这些胁迫信号会不断地激发相关转录因子的表达。而这些转录因子会相互作用于它们相应的顺式作用元件,然后启动特定基因的表达,那么,植物会出现一系列生理生化反应,从而改变了植物对外界不利环境的抗逆性。MYB转录因子在植物中是重要转录因子家族之一,而该类转录因子也与植物的抗逆性密切相关,其研究主要集中在模式植物中,如拟南芥和水稻。然而,到目前为止,有关番茄MYB类基因在非生物胁迫过程中的相关研究较少,利用qRT-PCR技术研究胁迫条件下番茄MYB类基因的表达情况也鲜见报道。且番茄作为一种重要的蔬菜作物,其植株抵抗外界不良环境的能力是一种重要的农艺性状,因而研究MYB家族基因参与番茄植株胁迫反应的分子机理具有一定潜在的应用价值。本研究根据NCBI数据库登录的番茄序列,克隆得到大小为1350bp基因片段其ORF为1245bp,编码414个氨基酸。表达模式分析表明,SlMYBL在成熟叶、茎及萼片中表达量较高。运用荧光定量PCR分析表明在外源激素IAA、MeJa、ABA等的处理下SlMYBL基因表达量上调。非生物胁迫结果表明,在高温、低温、伤害和盐处理中该基因表达也受到不同程度的诱导。本研究主要获得以下结果:1、根据NCBI数据库中登录的番茄序列,然后设计出特异引物,再从野生型番茄AC++中克隆并获得长度为1350bp基因片段。2、运用信息学分析SlMYBL蛋白,其具有保守的DNA结合域:MYB-like,以及C-末端和多个磷酸化位点,主要定位于线粒体基质和细胞质中,二级结构预测该蛋白含有26.33%的α螺旋,1.93%的β折叠,6.28%的延伸链,65.46%的无规则卷曲。且与许多已知植物MYB蛋白序列比对相似度高达到70%。3、在野生型番茄AC++和突变体Nr、rin各组织中,SlMYBL基因的表达模式分析发现:SlMYBL基因表达量较高的组织中有野生型(WT)的幼叶、成熟叶和老叶;而该基因表达量次之的组织中有根、茎和萼片。在Nr突变体IMG到B+4果实中的表达没有明显变化,但在突变体rin各个时期果实中的表达相对增强。4、荧光定量PCR分析外源激素对SlMYBL基因的表达:野生型番茄植株在外源激素处理后发现,SlMYBL基因受IAA、ABA、MeJa和GA3激素的诱导。5、非生物胁迫对SlMYBL基因的表达:高、低温处理的番茄植株后SlMYBL基因的表达上调。盐处理后SlMYBL基因表达也表现为上调,但叶比根表现更为敏感。伤害处理后可诱导SlMYBL基因的表达,但该基因对伤害的响应较慢。6、构建了pBI121-SlMYBL超表达载体和pBIN19-SlMYBL沉默载体,且通过农杆菌介导方法将超表达载体和沉默载体成功转入番茄AC++子叶外植体中,并获得了多个番茄转基因株系。7、转基因番茄株系在模拟干旱条件下,超表达株系比野生型株系生长状态更健康,沉默株系和野生型植株生长状态都较差。在脱水环境条件下,超表达株系脱水率较野生型株系缓慢。
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