【摘 要】
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背景肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发性肝癌中的95%以上,其发病因素多、进展速度极快,且早期常无明显症状,因而大多发现并诊断时已进入中晚期。HCC“高发病率、高病死率、低五年生存率”的临床特点促使其成为目前医学及生命科学亟待解决的难题之一。临床诊疗而言,除探寻HCC的进展机制外,寻找稳定可靠的诊断生物标志物,提高HCC的诊断率亦至关重要。外泌体（exoso
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背景肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发性肝癌中的95%以上,其发病因素多、进展速度极快,且早期常无明显症状,因而大多发现并诊断时已进入中晚期。HCC“高发病率、高病死率、低五年生存率”的临床特点促使其成为目前医学及生命科学亟待解决的难题之一。临床诊疗而言,除探寻HCC的进展机制外,寻找稳定可靠的诊断生物标志物,提高HCC的诊断率亦至关重要。外泌体（exosomes）是细胞内膜向内出芽形成的腔内小泡,其包含了包括非编码RNA（non-coding RNA,nc RNA）等众多小分子内容物,它们被外泌体运载到受体细胞并发挥细胞间信息交流的作用。微小RNA（microRNA,miRNA）是nc RNA中的一种,通过与细胞内的靶基因的互补结合调节靶基因的表达,在生物发育及疾病发展中发挥重要作用。miRNA作为细胞间信息交流的介质,可被选择性地分拣入外泌体中,且外泌体中的miRNA含量可能与母细胞中的存在差异。此外,miRNA被包裹在外泌体中,可有效防止被RNA酶降解,而使得顺利转移至远处靶细胞并发挥作用。基于此特性,HCC患者肝癌细胞来源的血浆外泌体miRNA作为诊断标志物相较血浆miRNA更为可靠。方法本研究招募140名志愿者（HCC患者和健康对照志愿者）,从血浆样本中提取外泌体。对9例样本（3例HCC术前、3例HCC术后和3例健康志愿者）利用高通量测序检测其中miRNA的表达水平。通过生物信息学分析及q PCR筛选候选miRNAs。使用训练队列构建logistic回归模型,然后使用独立队列验证。通过ROC曲线的AUC评价诊断准确性。此外,运用生物信息学分析,筛选与HCC进展相关的外泌体miRNA,并通过q PCR验证候选miRNA与HCC进展的相关性。结果我们鉴定出4组外泌体miRNA（miR-212-5p,miR-519b-3p,miR-1248和miR-1250-5p）,为HCC提供了较高的诊断准确性（训练、验证数据集的AUC分别为0.8450和0.8447）。同时,我们发现联合AFP的外泌体miRNA诊断面板对HCC的诊断效能AUC为0.9609。此外,通过q PCR验证了基于测序分析得到的与HCC进展相关的外泌体miRNA,miR-1248在HCC患者血浆外泌体中表达显著降低（t=2.849,P<0.05）。生物信息学分析表明,外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC的进展。结论血浆外泌体miRNA诊断组合（miR-212-5p,miR-519b-3p,miR-1248和miR-1250-5p）可用于HCC的诊断。血浆外泌体miRNA联合AFP显著提高了对HCC的诊断能力。血浆外泌体miR-1248或抑制HCC的进展。
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