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目的:骨髓间质干细胞(BM-MSCs)易于向肿瘤定向趋化、募集。肿瘤细胞分泌的exosomes可重塑BM-MSCs转分化为肿瘤相关MSCs参与肿瘤微环境形成。胃癌常以区域淋巴结转移多见,本研究旨在分析探讨并阐明淋巴结转移胃癌来源exosomes重塑BM-MSCs作用及其分子机制。方法:收集淋巴结转移胃癌细胞株(SGC-7901和HGC-27)及未转移胃癌细胞株(AGS和MGC-803)上清,分别处理BM-MSCs,采用细胞免疫荧光染色及Transwell迁移实验分别检测BM-MSCs中a-SMA表达及迁移能力的改变,体外采用Transwell迁移检测BM-MSCs上清作用后胃癌细胞转移能力的改变,观察比较两组上清体外对BM-MSCs促癌表型及功能的影响。采用超速离心法分离提取胃癌细胞上清exosomes,并通过透射电镜、纳米颗粒分析仪、Western blot及流式细胞术检测对exosomes进行鉴定。分析比较淋巴结转移胃癌细胞上清、exosomes及去exosomes上清对BM-MSCs促癌表型及功能影响,进一步结合裸鼠淋巴道转移模型体内外比较淋巴结转移胃癌细胞exosomes及未转移胃癌细胞株exosomes对BM-MSCs表型及功能影响差异。采用蛋白酶K单独或联合Triton-100去除exosomes蛋白成分,观察分析处理前后exosomes对BM-MSCs作用。采用Label-free法检测比较淋巴结转移胃癌及未转移胃癌细胞exosomes差异蛋白并进行验证。针对验证后蛋白,分别采用RNA干扰和基因过表达技术进行干预,观察干预前后exosomes对BM-MSCs的作用。收集临床区域淋巴结转移胃癌、未转移胃癌患者及健康体检者血清标本,分离相应的exosomes并进行鉴定。Western blot检测比较血清exosomes中蛋白含量差异。采用血清exosomes分别处理BM-MSCs,分析比较血清exosomes对BM-MSCs表型及功能的影响。结果:与未转移胃癌细胞上清比较,淋巴结转移胃癌细胞上清处理后BM-MSCs中a-SMA表达明显增加、迁移能力显著增强,作用后BM-MSCs上清明显促进胃癌细胞迁移。淋巴结转移胃癌细胞exosomes可重现细胞上清对BM-MSCs促癌表型及功能作用,去除exosomes上清可消除上清对BM-MSCs作用。淋巴结转移胃癌细胞exosomes较未转移胃癌细胞exosomes更能诱导BM-MSCs促癌表型及增强其体内外促胃癌转移功能。去除exosomes内蛋白可显著抑制淋巴结转移胃癌细胞exosomes对BM-MSCs作用。蛋白组学检测及验证发现淋巴结转移胃癌exosomes较非淋巴结转移exosomes富集Wnt5a。敲减淋巴结转移胃癌细胞exosomes中Wnt5a,可显著抑制其促BM-MSCs的表型和功能的作用。Wnt5a过表达慢病毒感染未转移胃癌细胞,使其exosomes高度富集Wnt5a,其可获得类似淋巴结转移胃癌细胞exosomes促BM-MSCs表型及功能的作用。临床区域淋巴结转移胃癌患者血清exosomes中Wnt5a含量显著高于未转移胃癌患者和健康体检患者血清exosomes,后两者无显著差异。区域淋巴结转移胃癌患者血清exosomes较未转移胃癌患者和健康体检患者血清exosomes具有更强的诱导BM-MSCs促癌表型及功能作用。结论:区域淋巴结转移胃癌exosomes较未转移胃癌可显著重塑BM-MSCs。Wnt5a在淋巴结转移胃癌exosomes中高度富集,是淋巴结转移胃癌exosomes重塑BM-MSCs的关键蛋白。本研究将阐释区域淋巴结转移胃癌重塑微环境细胞发生恶性进展新分子机制,有望为临床淋巴结转移胃癌患者诊疗提供潜在分子靶标。