【摘 要】
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目的:探究压力环境下髓核细胞外泌体miR-221对髓核祖细胞迁移的调控作用及其机制研究方法:从人退变椎间盘中的髓核组织分离提取髓核祖细胞（NPPCs）,并对其进行流式鉴定以及三系分化能力评估。使用超速离心法分离提取髓核细胞（NPCs）的外泌体并通过western blot、冷冻透射电镜以及纳米颗粒跟踪分析检测对其进行鉴定。通过RT-PCR来检测压力（1.0Mpa）对NPCs外泌体中mi R-221
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目的:探究压力环境下髓核细胞外泌体miR-221对髓核祖细胞迁移的调控作用及其机制研究方法:从人退变椎间盘中的髓核组织分离提取髓核祖细胞（NPPCs）,并对其进行流式鉴定以及三系分化能力评估。使用超速离心法分离提取髓核细胞（NPCs）的外泌体并通过western blot、冷冻透射电镜以及纳米颗粒跟踪分析检测对其进行鉴定。通过RT-PCR来检测压力（1.0Mpa）对NPCs外泌体中mi R-221含量的影响,Transwell试验来评估在压力条件下NPCs外泌体mi R-221对NPPCs迁移的调控作用。荧光素酶报告基因检测mi R-221对迁移相关靶基因PTEN的结合能力,并使用Western blot和RT-PCR试验检测不同压力环境下NPPCs中PTEN表达水平的变化。通过Western blot试验检测在压力条件下NPCs外泌体中mi R-221的变化对NPPC中PI3K、AKT通路蛋白表达水平影响。结果:对提取的NPPCs进行表面标志物流式检测,结果显示CD73为99.1%,CD90为96.3%,CD105为97.2%,Negative Cocktail为1.1%,提示所提取的NPPCs达到MSCs标准。三系分化结果显示提取的NPPCs具有良好的成脂、成骨、成软骨分化能力。Western blot、冷冻透射电镜及纳米颗粒跟踪分析检测提示提取的髓核细胞外囊泡符合外泌体标准。RT-PCR结果显示,过度压力会使NPCs外泌体中mi R-221含量下降。Transwell试验结果显示,压力会抑制NPPCs的迁移,而NPCs外泌体mi R-221能够促进NPPCs迁移。荧光素酶报告基因检测和Western blot结果提示mi R-221能够作用于PTEN并抑制其表达。Western blot和RT-PCR结果提示压力会促进NPPCs中PTEN的表达。Western blot提示髓核细胞外泌体mi R-221能够激活NPPCs中的PTEN/PI3K/Akt信号通路。结论:髓核细胞外泌体miR-221能够增强NPPCs的迁移能力,并能够通过PTEN/PI3K/AKT信号通路缓解过度压力对NPPCs迁移的抑制作用。
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