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采集安徽省巢湖市、霍邱县及定远县三个地区患球虫病鸡的盲肠,实验室分离培养,并进行单卵囊分离扩增,运用生物学特性的观察与测定及聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)对单卵囊分离物进行鉴定,为纯种柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)的分子生物学研究奠定基础。 试验选择马杜拉霉素(Maduramicin,MAD)、莫能霉素(Monensin,MON)、妥曲珠利(Toltrazuril,TOL)、磺胺氯吡嗪钠(Sulfachloropyrazine sodium,SUS)及氯羟吡啶(Clopidol,CLP)5种药物,鸡体试验法检测三地球虫的耐药性,用最适抗球虫活性百分率(Percent of optionanti-coccidial activity,POAA)、病变记分减少率(Reduction of lesion scores,RLS)、相对盲肠卵囊产量(Relative oocyst production,ROP)及抗球虫指数(Anti-coccidial index,ACI)四项指标对三地球虫进行耐药性评价,并根据四项指标中阳性指标数量判定耐药程度。同时,通过功能亚基、DNA随机多态性扩增(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)及同工酶电泳分析等分子生物学方法比较耐药株与敏感株间的差异,观察耐药虫株的遗传变异情况。 依据三个不同地区虫株的耐药情况,试验选用新药阿德呋啉粉剂和水溶剂进行疗效观察,以ACI和综合耐药性指数(Gain Index,GI)综合评价阿德呋啉对耐药虫株的治疗效果。 试验结果表明:1)单卵囊分离:1.0％琼脂单卵囊分离法简便易行,成功率高。三个地区的单卵囊感染成功率分别为50%、57%和29%,经鉴定均为纯种E.tenella。2)鸡球虫体内检测:分离的虫株对试验所选5种抗球虫药均有不同程度的耐药性。巢湖株(CH株)氯羟吡啶组(CLP组)ACI值为183.26,敏感,而该株对MON已呈完全耐药,对MAD、TOL及SUS已呈中度耐药。霍邱株(HQ株)妥曲珠利组(TOL组)ACI值为180.48,敏感,而对SUS和CLP已呈高度耐药,对MAD和MON已呈中度耐药。定远株(DY株)对5种抗球虫药均不敏感,其中对MAD、TOL及SUS已呈高度耐药,而对MON和CLP呈轻度耐药。3)球虫体外分析:与敏感株相比,安徽地区3株E.tenellacox1和cox3基因序列均无明显差异,同种不同地理株间的相似值均较高,说明E.tenellacox1和cox3基因序列相对保守,但有关遗传变异的情况有待进一步研究;RAPD扩增图谱都有不同的带,且不同虫株间亦有相似或位置相同的条带,它们之间的相似值位于50.00%—69.39%之间,SH敏感株与DY株间的SI值最小为50.00%,CH株与HQ株间的SI值最大为69.39%;耐药株间的平均SI值为58.05%,敏感株间的SI值为52.94%,与不同敏感株相比,各虫株SI值均较低,变异程度大;敏感株LDH仅有一深色的条带,HQ株也仅有一条与敏感株相同的条带,且地方耐药株间存在交叉条带,如CH株与DY株间存在交叉条带,只是条带颜色深浅不一;敏感株的GPI有两条带,而安徽地区耐药株均有不同的差异,耐药株与敏感株间、耐药株间均存在交叉条带,如CH株、HQ株间重复了GPI-2和GPI-5两条带,但带的深浅不一,敏感株与DY株间重复了GPI-3条带;敏感株G6PD仅有一条带,CH株和HQ株有相同的G6PD-2带,但HQ株多出一条G6PD-3深带,DY株与敏感株有相同的G6PD-1,但多出一条G6PD-4浅带。4)阿德呋啉疗效观察:与阳性对照组相比,除HQ株拌料给药组外,其余阿德呋啉给药组ACI值均高于180,对三地鸡球虫病均有良好的疗效。阿德呋啉拌料给药与饮水给药相比,CH株中,拌料给药组ACI值和GI值分别为185.70和87.05,高于饮水给药;HQ株中,饮水给药组ACI值和GI值分别为183.57和81,59,高于拌料给药组;DY株中,拌料给药组ACI值和GI值分别为198.27和99.58,高于饮水给药,说明不同的给药方式对不同虫株会产生不同的效果,但二者对上述虫株均有良好的疗效。