【摘 要】
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癌症近年来在全世界的发病率不断提升,严重危害着人们的生命健康。传统的癌症治疗手段有化疗和放疗等,通常还辅以手术治疗。然而由于缺乏肿瘤靶向的功能,传统癌症治疗手段在杀死肿瘤细胞的同时,也会对人体正常细胞产生极大的副作用,严重限制了其治疗效果。因此开发一种精准、高效和毒副作用较小的治疗方法是当前生物医学领域需要进行深入研究的重点。光动力学免疫治疗是一类新的基于光响应的肿瘤治疗方法,主要包括三种成分:光
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癌症近年来在全世界的发病率不断提升,严重危害着人们的生命健康。传统的癌症治疗手段有化疗和放疗等,通常还辅以手术治疗。然而由于缺乏肿瘤靶向的功能,传统癌症治疗手段在杀死肿瘤细胞的同时,也会对人体正常细胞产生极大的副作用,严重限制了其治疗效果。因此开发一种精准、高效和毒副作用较小的治疗方法是当前生物医学领域需要进行深入研究的重点。光动力学免疫治疗是一类新的基于光响应的肿瘤治疗方法,主要包括三种成分:光、光敏剂及氧气。在光动力学治疗阶段,光敏剂在光激发下能够由氧气产生具有细胞毒性的活性氧,活性氧能直接破坏肿瘤组织、诱导肿瘤细胞凋亡。在免疫治疗阶段,活性氧进一步引起免疫原性细胞死亡、触发树突状细胞成熟及激活宿主免疫系统,从而利用免疫系统精准杀死肿瘤细胞并抑制肿瘤生长。光动力学免疫治疗的高选择性、低毒副作用等特点有效解决了传统肿瘤治疗手段副作用大、选择性差的问题,具有很高的临床应用价值。然而,光动力学免疫治疗在抑制肿瘤生长过程中仍面临一些挑战,特别是肿瘤微环境的缺氧问题。肿瘤微环境缺氧不仅限制了光激活下的活性氧产生,抑制了光动力学治疗效果;而且缺氧促使肿瘤周围产生分布不均匀的异常血管,阻止了免疫细胞进入肿瘤组织内部和抑制了免疫细胞的原位增殖,抑制了免疫治疗效果。因此,解决肿瘤微环境的缺氧问题是提高活性氧产生和激活免疫系统的关键手段,可以让免疫细胞高效杀死癌细胞、提高光动力学免疫治疗疗效。过氧化氢的催化分解反应是解决肿瘤微环境缺氧问题的有效手段。肿瘤微环境和肿瘤细胞内存在着过量的过氧化氢分子,可以通过催化剂让过氧化氢发生类芬顿反应,原位产生氧气,解决光动力学免疫治疗的缺氧问题。金属有机框架(MOF)纳米材料是一种由金属离子节点和有机配体组装而成的多孔纳米材料,MOF纳米材料能够让金属离子与有机配体在生物体内稳定存在,并且通过被动靶向作用分布于肿瘤组织中。其中,以三价铁离子为金属节点构筑的铁(Ⅲ)基MOF可以催化过氧化氢发生类芬顿反应产生氧气,因而在癌症治疗中具有突出优势。通过将三价铁离子与有机光敏剂分子组装成MOF纳米材料,可以在肿瘤组织中原位催化过氧化氢产生氧气,进而通过光敏剂在光照下的光敏化作用产生活性氧,引发高效的光动力学免疫治疗。在本论文中,我们利用三价铁离子和光敏剂卟啉衍生物合成了铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料(Fe-MOF)用于解决肿瘤微环境的缺氧问题,促进小鼠肿瘤细胞内活性氧的大量产生,有利于进一步激活免疫系统。我们进而探究了该纳米材料对荷瘤小鼠的生长抑制效果及光动力学免疫治疗效果,最终在活体层面成功地激活了小鼠体内的免疫应答,实现了光动力学免疫治疗。主要内容如下:(1)我们通过溶剂热法合成了尺寸均一、分散性好的铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料,透射电子显微镜表征结果显示该纳米材料具有纳米梭结构。其次,我们通过紫外-可见光吸收光谱、傅里叶变换红外光谱、X射线光电子能谱对其分子结构进行了表征,证明三价铁与卟啉衍生物成功组装成了MOF结构。此外,我们通过溶解氧测定仪和活性氧探针分别检测了在模拟的肿瘤微环境和肿瘤细胞内铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料产生的氧气及活性氧含量。结果表明铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料在模拟的肿瘤微环境和肿瘤细胞内都能够通过类芬顿反应产生大量的氧气,以及在在光照下产生活性氧。我们通过活死细胞染色实验证实了产生的活性氧能够有效杀死肿瘤细胞。实验结果表明,该铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料能有效解决光动力学治疗中肿瘤组织的缺氧问题,有望用于激活免疫系统杀死肿瘤组织。(2)我们进一步以乳腺癌荷瘤小鼠为实验对象,研究了光照下铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料对肿瘤组织的生长、主要器官的毒副作用及免疫细胞激活的影响。我们通过测量小鼠肿瘤组织体积和质量来评估铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料的肿瘤抑制效果,结果显示该材料成功减少了小鼠肿瘤的体积和质量。我们通过流式细胞仪研究铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料在光照后对免疫系统的刺激作用,结果表明T淋巴细胞和树突状细胞增多,参与免疫抑制的调节性T细胞和骨髓源性抑制细胞减少,证明该材料成功引发了小鼠体内的抗肿瘤免疫反应。我们还对小鼠组织切片进行苏木精和伊红染色,探究肿瘤组织中肿瘤细胞的结构形态及材料对正常组织器官的影响,结果表明铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料能有效破坏肿瘤组织,而对正常组织几乎没有影响,证明该材料具有良好的生物相容性和优异的肿瘤微环境响应能力。我们的体内实验结果显示,铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料能有效杀死肿瘤细胞,同时成功激活了小鼠体内的抗肿瘤免疫应答和实现免疫治疗,并且对正常组织几乎没有副作用。该铁(Ⅲ)基金属有机框架纳米材料由于具有较低的毒性及高效的肿瘤治疗效果,有望在临床治疗中发挥重要的作用。
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