肺癌的发病率和病死率居于全球恶性肿瘤中首位,且在不断升高。我国的肺癌现状更加严峻,由于发病率的快速攀升,肺癌在恶性肿瘤中已居于导致我国城市人口死亡的病症之首。如果没有相应措施来控制如吸烟和空气污染这些肺癌的诱因,按现有数据推测,十年以后,我国每年将有100万人口发生肺癌,成为肺癌患病人数最多的国家。肺癌患者在早期往往没有明显症状,去医院就诊时大多已处于晚期,发生了癌转移,错过了外科手术和放疗的最佳时机,因此得不到根治,预后很差。因此,解决肺癌危机的出路在于肺癌的早期诊断。　　免疫酶染色法(Immunoenzymatic Assay,IEA)以酶标抗体催化底物显色来反映抗原抗体的结合,广泛应用于抗原定位、病原定性鉴定等。该方法从分子层面研究肺癌的基因和表观遗传学特征,有助于从本质上认识肿瘤,从而实现早期诊断,显示出优于传统的基于肿瘤组织学类型和临床表现的诊断方法的巨大应用潜力。传统免疫酶法使用的是单克隆抗体或多克隆抗体,由于免疫动物这一过程必不可少,因此制备过程复杂且耗时,成功率难以得到保障。本论文用噬菌体展示肽库筛选肺癌细胞特异性结合肽来建立免疫酶染色法,具有技术难度低、制备周期短的突出优势。　　噬菌体展示技术是通过基因工程手段将外源蛋白或肽段的基因克隆到噬菌体基因组DNA中,使其表达在噬菌体衣壳蛋白上,具有独立的空间构象。噬菌体展示技术结合了多肽的亲和活性和噬菌体的可扩增性,并将展示肽的基因型和表型统一在同一病毒颗粒内,实现了两者间的连接和转化,在通过“吸附-洗脱-扩增”的重复过程筛选出与靶标特异性结合的噬菌体克隆后,通过测定基因序列可推断展示在噬菌体表面的外源蛋白的氨基酸序列。噬菌体展示技术已被大量应用于肿瘤研究方面,如肿瘤抗原表位的筛选、肿瘤标志物的筛选以及肿瘤抗体的制备等,国内外已有大量研究报道,为开发新的肿瘤诊断方法和靶向治疗药物奠定基础。　　本课题以肺腺癌A549细胞为筛选靶标,人胚肺二倍体helf细胞做反相吸附细胞,从噬菌体随机十二肽库中筛选出与肺癌细胞特异性结合的噬菌体多肽,用其替代一抗,酶标抗噬菌体抗体作二抗,建立检测肺癌细胞的免疫酶染色法。4轮差减筛选后,从最后一轮的滴度检测平板上,随机挑取了分离良好的24个克隆进行ELISA鉴定,得到了9个对A549细胞具有高亲和力的克隆,随后对亲和力最好的5号和10号噬菌体克隆进行细胞免疫化学鉴定,结果显示5号噬菌体克隆的特异性优于10号。因此用亲和力和特异性最好的5号噬菌体克隆建立了检测肺癌细胞的免疫酶法,并探讨了最佳实验条件,即5号噬菌体滴度5×109pfu/10μl,HRP/anti-M13抗体1:5000稀释,或5号噬菌体滴度1×109pfu/10μl,HRP/anti-M13抗体1:1000稀释。噬菌体克隆和HRP/anti-M13抗体的作用时间可选1h或1.5h。