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本试验通过对不同浓度蛋氨酸作用于热处理后的体外培养奶牛乳腺上皮细胞进行研究,测定其对乳腺上皮细胞增殖、抗氧化性及凋亡方面的影响,从细胞水平探讨蛋氨酸对热应激奶牛及其乳腺的保护作用。本试验分为两个部分：1、热应激对体外培养奶牛乳腺上皮细胞影响37℃正常培养的乳腺细胞(全部浸没)放置于42℃的恒温水浴锅中,热处理30min后立即放回37℃恢复培养,并在不同时间(0、3、6、12、24、48h)收集细胞样品,通过MTT测定高温热处理对体外培养乳腺上皮细胞增殖的影响,选出对细胞增殖影响最大的恢复时间。结果表明：42℃,30min高温热处理乳腺上皮细胞后,6h差异显著低于0h(P<0.05),培养箱中恢复6h能显著抑制细胞的增殖。因此,后续试验均选用6h为热应激后恢复的时间。用两组含不同浓度(0、30、60、90、120mg/L)蛋氨酸的DMEM培养基培养细胞2d后,37℃组用37℃水浴0.5h,恢复6h；42℃组(热处理组)42℃水浴0.5h,恢复6h,测定细胞活力,培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及细胞凋亡率。结果表明,与37℃组相比,42℃组细胞活力降低,LDH活性、MDA含量均升高,SOD活性下降,细胞凋亡率升高,说明42℃,0.5h热处理使细胞产生了热应激,但由于热处理时间较短,热应激呈现不够明显。2、不同浓度蛋氨酸对热处理体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖、抗氧化性能及凋亡的影响用含不同浓度(0、30、60、90、120mg/L)蛋氨酸的DMEM培养基培养细胞2d后,42℃水浴0.5h后立即放回37℃恢复培养6h,测定细胞活力,培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及细胞凋亡率。结果表明,与0mg/L蛋氨酸组相比,60mg/L蛋氨酸组使细胞活力增强(P<0.05);添加30mg/L、60mg/L蛋氨酸能增强热处理下乳腺上皮细胞SOD活性(P<0.05)；MDA中,60mg/L蛋氨酸组含量最低(P<0.05)。培养液中LDH活性,60mg/L蛋氨酸组最低(P<0.05)。流式细胞仪测定细胞凋亡后发现,添加30、60mg/L蛋氨酸能显著促进细胞增殖、降低细胞早期凋亡率(P<0.05),其中添加60mg/L蛋氨酸最为明显。结论,培养基中添加30、60mg/L蛋氨酸能促进高温条件下乳腺上皮细胞增殖,提高细胞的抗氧化水平,能起到抗凋亡的作用。