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目的： 观察尘螨抗原(Dermatophagoides Pteronyssinus，Der p)、革兰氏阴性菌脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)、未甲基化的CpG二核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotide，CpG ODN)通过非IgE依赖性途径直接作用小鼠肥大细胞P815后对Toll样受体4和TLR9的表达影响。 方法： 1.将P815细胞接种至6孔平底细胞培养板培养24h后，予不同浓度尘螨抗原（Der p为0，0.0001，0.001，0.01，0.1μg/ml）处理不同时间(12h，24h，36h)。用实时荧光定量PCR(Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR)法检测各组TLR4 mRNA的表达变化，并确定Der p的最佳作用浓度和时间;免疫印迹（Western Blotting，WB）法检测不同浓度尘螨抗原直接作用P815肥大细胞36h后TLR4蛋白的表达变化。 2.将P815肥大细胞接种至6孔板培养24h后，分别予不同浓度CpG ODN(0，0.06，0.6，6μg/ml)处理12h和24h。用Real-time PCR法检测各组TLR9 mRNA的表达变化。 3.用LPS、CpG ODN单独或联合尘螨抗原(Der p)处理P815肥大细胞后，提取蛋白进行Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝染色(Coomassie Brilliant Blue Staining)法对凝胶进行染色，通过对染色蛋白的条带分析及目的蛋白的分子量大小，判断目的蛋白的位置分布。 4.将P815肥大细胞接种于25cm2培养瓶中，加或不加尘螨抗原(Der p)处理后24h后，再予LPS或CpG ODN继续处理24h。实验分为6组:空白对照组（A组），LPS10μg/ml处理组（B组），CpG ODN0.5μg/ml处理组（C组），Derp0.01μg/ml处理组（D组），Der p0.01μg/ml+LPS10μg/ml处理组（E组），Derp0.01μg/ml+CpG ODN0.5μg/ml处理组（F组）。用逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)法检测各组细胞TLR4 mRNA和TLR9 mRNA的表达变化;免疫印迹法检测TLR4和TLR9蛋白的表达变化。 结果： 1.TLR4 mRNA和TLR9 mRNA在P815肥大细胞上的表达 用Der p、LPS和CpG ODN单独或联合处理P815肥大细胞后，RT-PCR法检测结果显示:TLR4 mRNA和TLR9 mRNA能在P815细胞上检测到。 2.TLR4和TLR9蛋白在P815肥大细胞上的表达 用Der p、LPS和CpG ODN单独或联合处理P815肥大细胞后， WB结果显示:TLR4和TLR9蛋白在P815细胞上有表达。 3.不同浓度、时间尘螨抗原作用P815肥大细胞后TLR4 mRNA的表达变化 用不同浓度的尘螨抗原(Der p)直接作用P815细胞12h、24h、36h后，Real-Time PCR结果显示:与空白对照A组比较，B组(Der p0.0001μg/ml)作用P815细胞不同时间后对TLR4 mRNA的表达均无明显改变(P＞0.05)，而C组(0.001μg/ml)、D组(0.01μg/ml)和E组(0.1μg/ml)的尘螨抗原作用P815细胞后，TLR4 mRNA的表达明显升高，具有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）;其中作用36h后，C组、D组、E组的TLR4 mRNA表达显著升高（P＜0.05或P＜0.01），且呈浓度依赖性上调。 4.不同浓度、时间CpG0DN作用P815肥大细胞后TLR9 mRNA的表达变化 用不同浓度CpG ODN直接作用P815肥大细胞12h或24h后，Real-Time PCR结果显示:与空白对照A组比较，B组(CpG ODN0.06μg/ml)、C组(0.6μg/ml)、D组(6μg/ml)作用P815细胞不同时间后，TLR9 mRNA的表达明显升高，差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。 5.不同浓度尘螨抗原直接作用P815肥大细胞后TLR4蛋白的表达变化 用不同浓度尘螨抗原(Der p)直接作用P815肥大细胞36h后，WB结果显示:相较空白对照A组，B组(Der p0.0001μg/ml)、C组(0.001μg/ml)、D组(0.01μg/ml)和E组(0.1μg/ml)的TLR4蛋白表达均明显升高，差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01），且呈浓度依赖性上调。 6.LPS和CpG ODN单独或联合尘螨抗原(Der p)作用P815肥大细胞后TLR4和TLR9蛋白的表达变化 以LPS10μg/ml、CpG ODN0.5μg/ml浓度分别单独或联合尘螨抗原(Der p0.01μg/ml)处理P815肥大细胞共48h后，WB结果显示:A组TLR4蛋白表达量为(1.63±0.21)，其余各组TLR4表达量分别为B组(1.87±0.25)、C组(1.72±0.19)、D组(1.78±0.17)、E组(1.93±0.26)、F组(1.80±0.14)。与A组比较，TLR4蛋白表达均未见明显改变(P＞0.05)。 以LPS10μg/ml、CpG ODN0.5μg/ml浓度分别单独或联合尘螨抗原(Der p0.01μg/ml)处理P815肥大细胞共48h后， WB结果显示:A组TLR9蛋白表达量为(1.12±0.12)，其余各组TLR9表达量分别为B组(1.04±0.12)、C组(1.25±0.10)、D组(1.07±0.09)、E组(1.02±0.15)、F组(1.09±0.10)。与A组比较，C组的TLR9蛋白有升高，差异有显著性(P＜0.05)，其余各组与A组比较未见明显改变(P＞0.05);另F组与C组比较，差异有显著性(P＜0.01)。 结论： 1.P815肥大细胞可表达TLR4、TLR9受体。 2.尘螨抗原直接作用P815肥大细胞上调TLR4。 3.CpG ODN直接作用P815肥大细胞上调TLR9。 4.尘螨抗原(Der p)联合CpG ODN处理P815细胞可抑制TLR9受体的上调作用。 5.LPS单独或联合尘螨抗原(Der p)处理P815细胞对TLR4、TLR9蛋白表达未见明显改变。