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第一部分 大鼠原位移植性骨肉瘤模型及生物学行为观察 目的:建立大鼠 UMR106 骨肉瘤细胞株的同种异体原位移植模型,为下一步的 HIFU 治疗提供真实可靠的实验基础。 方法:采用完整瘤组织块原位移植到 SD 大鼠右胫骨骺端,分不同时期处死,观察其生长及转移特性,同时检测其血清中 ALP 水平的变化。 结果:肿瘤原位移植成功率为 91.67%,移植后 1-2 周肿瘤从髓内向髓外生长,3 周骨皮质破坏侵犯软组织但无肺转移,4 周肺部可见少量小转移灶,5 周骨皮质破坏更加明显,肺转移灶明显增加,6-7 周大鼠双肺广泛转移因呼衰而死亡。ALP 水平 1-2 周逐渐升高,3 周时达最高峰,4-6 周逐渐下降,7 周接近一平台期,但仍高于同期正常水平。 结论:该模型成功率高,成本低,实用性强,模拟了人类骨肉瘤临床发病和发展过程,可作为研究骨肉瘤较理想的模型。 第二部分 HIFU 治疗大鼠骨肉瘤对 B7-CD28 共刺激通路的影响 目的:检测骨肉瘤大鼠HIFU治疗前后脾细胞中抗原递呈细胞(APC)表面B7分子的表达和T细胞上相应配体CD28的表达,以及血清中IL-2水平,以探讨 HIFU 治疗是否通过影响 B7-CD28 共刺激通路使 T 细胞活化,引起抗肿瘤免疫反应。 方法:将 25 只移植成功模型鼠按随机区组设计分配为 5 组(骨肉瘤组、HIFU 后即刻组、HIFU 后 2 天组、HIFU 后 5 天组、HIFU 后 15 天重庆医科大学硕士研究生学位论文 4组)。另取 15 只正常 SD 大鼠分为 3 组(正常对照组、HIFU+正常鼠 2天组、HIFU+正常鼠 5 天组)。HIFU 组和 HIFU+正常鼠组分别用 HIFU 治疗和辐照,单点单次治疗时间为 10S,总共治疗时间分别为 250S 和 90S。未治疗组、HIFU 各组分别在相应时间取原位肿瘤、肺组织做光镜和电镜检查;各组分别在相应时间取脾行流式细胞仪检测 CD4+CD28+、CD80+、CD86+表达,采血取血清检测 ALP 水平和做 ELISA 检测 IL-2 水平。结果:1.HIFU 治疗后靶区肿瘤呈凝固性坏死,坏死区胞核碎裂、溶解消失,嗜酸染色增强。残存骨小粱中骨母细胞坏死消失,骨小粱结构尚保持。HIFU 后 15 天,可见坏死区与正常交界边缘有肉芽组织形成,髓腔边缘可见间叶细胞增生并向软骨细胞分化,残存骨小粱中有细胞增生。2.FCM 和 ELISA 结果显示:(1)与正常组相比,骨肉瘤组CD4+CD28+、CD4+表达有降低,CD80+、CD86+表达、IL-2 分泌稍有增加,但均无统计学意义。(2)与骨肉瘤组相比,HIFU 治疗后 CD4+CD28+表达明显增高,5天1、5天有显著差异(P<0.05)C;D4+表达均明显增高(P<0.05或 P<0.01);CD80+表达有增加,即刻、5 天有显著差异(P<0.05);即刻、2 天 CD86+表达有增加,但均无统计学意义;IL-2 分泌明显增加(P<0.05 或 P<0.01)。(3)HIFU 组内两两比较,15 天 CD4+CD28+表达明显高于其它时段,与即刻、2 天相比有显著差异(P<0.05);15 天 CD4+表达高于其它时段,与即刻相比有显著差异(P<0.05);5 天 CD80+表达最高,与 2 天相比有显著差异(P<0.05);2 天 CD86+表达最高,与 5 天相比有显著差异(P<0.01);IL-2 随时间变化依次增高,但均无统计学意义。(4)与正常组相比,HIFU 组 CD4+CD28+表达明显增高,15 天有显著差异(P<0.05)C;D4+C、D80+表达也明显增加5,天有显著差异(P<0.05);即刻、2 天、5 天 CD86+表达增加,即刻、2 天有显著差异(P<0.05 或P<0.01);IL-2 均有明显增高(P<0.05 或 P<0.01)。(5)与 HIFU+正常鼠组(2、5 天)相比,HIFU 组(2、5 天)CD4+CD28+、CD4+、CD80+、CD86+