CIDEc互作蛋白筛选及CIDEc转录调控与功能研究

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随着人们物质生活水平的逐步提高,脂肪代谢相关疾病日益成为危害全世界人民健康的重要因素,而脂滴作为脂肪组织最重要的储能结构在脂肪的能量调节上有着极其重要的地位,因而在脂肪类代谢疾病的发病过程中有着关键作用, CIDEc/FSP27,细胞死亡活化蛋白(Cell Death-Inducing DFF45-Like Effectors, CIDEc.在鼠中被称为FSP27)是一种主要定位到细胞脂滴上,在诱导脂滴融合,保护中性脂方面有着重要的作用的蛋白,在敲除CIDEc/FSP27的小白鼠上,可以明显的看到白色脂肪组织减少,基础能量代谢加快,脂滴尺寸减小,并且该小鼠还可以抵抗由食物所诱导的肥胖。本文主要是从两个方面研究CIDEc相关的功能,前半部分主要集中在于筛选CIDEc的互作蛋白。后半部分着重在于对CIDEc转录调控及其功能的研究。  本文主要采用了交联(cross-link)质谱技术(MS),双荧光素酶技术,实时定量PCR技术,westrern杂交技术,油红O染色技术从而获得以下研究结果:  1.通过化学交联-质谱联用技术,得到一些可能与CIDEc蛋白互作有关的数据。  2.超表达SREBP1c可增加CIDEc mRNA和蛋白水平的表达。  3.确定了SREBP1c可特异结合CIDEc启动-74bp到-49bp区域。  4. SREBP1c可通过调控CIDEc表达改变脂滴的大小及数量,同时甘油三脂分析发现SREBP1c可通过调控CIDEc的表达稳定胞内甘油三酯水平。  5.超表达 CIDEc可以影响细胞内甘油三酯氧化分解、转运、及合成相关基因的表达从而造成甘油三酯的积累。  实验结论:SREBP1c可通过调控CIDEc表达,改变脂滴大小及数量以稳定脂滴细胞甘油三酯的代谢水平。
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