鲤鱼JAK/STAT分子的基因克隆及组织表达模式分析

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JAK-STAT信号通路是许许多多的细胞因子、生长因子和激素分子最主要的细胞内的信号通路之一,它的功能包括参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等重要的生物生理反应过程。两面神激酶(JAK, Janus kinase)这种酶是一种叫做酪氨酸蛋白的激酶,截止到今天为止已经发现有了它的四个成员,这就是我们常见的JAKl-3和TyK2,它们既可以去催化与它们联系起来的的受体发生酪氨酸残基的磷酸化,也可以去磷酸化多种多样的含有Srv同源区2(SH2)结构域的信号分子。信号转导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription, STAT)是一类含有能与磷酸化的酪氨酸结合的Src同源区2(SH2)的信号分子,它的成员包括STAT1、 STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6等,这几个家族成员都含有SH2和DNA结合域等4个结构域。STAT通过其SH2结构域与酪氨酸-磷酸化细胞因子受体结合,之后通过JAK使其特殊的C端酪氨酸残基磷酸化。磷酸化的STAT从与其结合的受体上解离,并且通过它的SH2结构域形成同源的或者异源的二聚体;再之后可以进入核内,对核内的基因调控区发生作用,调节与其对应的基因的表达,就此就可以完成它的细胞因子的信号转导。本文的实验运用了RACE-PCR克隆得到了鲤鱼的STAT5、STAT6和TYK2基因氨基酸的全长序列,运用实时荧光定量PCR分析鲤鱼STAT5、STAT6和TYK2基因的组织表达模式,以期为说明鲤鱼JAK-STAT信号通路及其调节功能奠定基础。结果显示:鲤鱼STAT5、STAT6和TYK2序列全长分别为494bp,2826bp和4959bp。开放阅读框(ORF)分别为2091bp,2310bp,3489bp。推断分别编码696aa,769aa,1162aa。经SMART和Scanprosite工具软件对蛋白结构预测显示,鲤鱼STAT5和STAT6在具有N-保守区、螺旋结构域、DNA结合区和SH2结构域,TYK2具有FERM结构域、SH2结构域、假激酶区和激酶区。通过多重序列比对及系统发育树构建显示,鲤鱼STAT5、STAT6和TYK2大部分别与斑马鱼对应的序列有最高同源性。实时荧光定量PCR的结果表明STAT5、STAT6和TYK2的]mRNA表达均具有组织差异性。鲤鱼TYK2在皮肤中表达水平最高,其次是肠、血液和肌肉,再次是头肾和脑,在心、鳃、肝和脾中表达水平较低。鲤鱼TYK2和JAK1基因在血液、肝、肌肉、脾、皮肤、脑、心、头肾、鳃、肠各组织中均有表达,TYK2在皮肤中表达量最高,其次是肠、血液和肌肉组织。JAK1基因在在血液、肝脏和脑中表达较高。
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