第1部分特发性膜性肾病抗非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A抗体纯化与鉴定目的:纯化特发性膜性肾病患者体内的抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体并进行鉴定。方法:选择临床表现大量蛋白尿(≥3g/24小时),病理确诊为特发性膜性肾病的10位患者位研究对象,在使用激素及其他免疫抑制剂治疗前各抽取10ml EDTA抗凝血,离心后取其血清,选取正常人10名为对照;将患者组和对照组血清各自等比例混合,先用IgG分离试剂盒分离出IgG并用SDS-PAGE电泳证实并测定浓度;再进一步用免疫共沉淀试剂盒,逆向提取患者组和对照组血清中的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体,测定浓度后分别用足细胞蛋白和商品化Myosin9蛋白片段(分子量约110KD)为抗原进行WestemBlot,并予以证实。结果:特发性膜性肾病患者血清中的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体可以通过本研究中的方式进行一定程度上的纯化,且能达到一定浓度,明显高于正常对照的水平,有临床意义。结论:本研究利用免疫共沉淀的原理,主要经过两个步骤从患者体内提纯出一定浓度的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体,且与正常对照组提取浓度有显著差异,根据提纯的结果可以发现患者和正常对照的在该种抗体上存在区别,由此能更好地证实非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体在特发性膜性肾病患者可能存在的重要作用,结合前期的研究似乎可以推论非肌肉肌球蛋白重链ⅡA极有可能为特发性膜性肾病的新发现靶抗原之一。因此,可以考虑用从特发性膜性肾病人体提纯的该抗体进行特发性膜性肾病的免疫机制和疾病转移的研究。第2部分人抗非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A抗体被动性大鼠膜性肾病模型的制备目的:探讨用从特发性膜性肾病患者体内提取的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体诱导被动性大鼠膜性肾病模型的方法及病理特点。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为9组:正常对照组,注射人抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体后3天组,5天组,7天组,14天组,21天组,28天组,35组,42天组,每组5只。观察各组大鼠24小时尿蛋白定量的变化,肾脏光镜、免疫荧光、透射电镜的病理学改变。结果:与正常对照组(第0天)比较,注射人非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体组的大鼠从第7天开始24小时尿蛋白总量增加,尿蛋白水平呈现逐渐上升的趋势,第14天时尿蛋白为13.44±1.22,差异具有显著性(P<0.05),第21天开始尿蛋白总量有显著增加(P<0.01),到42天时达到最多(35.15±3.58,P<0.01);光镜下,注射人抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体的大鼠肾脏组织在第14天,第21天,第28天的HE,Masson,PASM和PSM染色与正常对照组(第0天)比较未出现明显变化,仅有轻度系膜增生;免疫荧光结果显示:大鼠注射抗体后仅第1、3天肾组织内可检测到人IgG沿肾小球基底膜颗粒样沉积。而自身IgG在第7天后逐渐增强,第21天达到最强,主要沿基底膜颗粒样沉积,荧光强度无衰减趋势。电镜下,注射人非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体后大鼠足细胞逐渐出现部分足突融合,扁平,消失,第28天足突融合较为明显,此后上皮下致密物出现并逐渐增加,到第42天时基底膜局灶性增厚明显,这明显有别于正常对照组。结论:从特发性膜性肾病患者血清提取的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体可以免疫SD大鼠出现类似于特发性膜性肾病的蛋白尿增加及病理改变特点,因此我们可以认为由非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体诱导的被动性大鼠膜性肾病模型的制备成功。由此可见我们可以利用患者血清在动物身上实现疾病的转移以及进一步应用于特发性膜性肾病的机制研究。