前言肺癌的发生是多因素、多基因参与的复杂过程,内外环境致癌物所导致的DNA损伤得不到有效修复而引起基因突变的累积是肺癌发病的重要原因之一;肺癌放化疗抵抗是肺癌术后预后不良的重要影响因素。DNA损伤修复系统在修复基因、维持基因组稳定性及拮抗癌变中起着重要作用。DNA修复因子的低表达或突变往往伴随着基因不稳定性增加,甚至是肿瘤恶性表型的产生,DNA修复因子的过表达可降低放化疗的敏感性。切除修复交叉互补基因1(Exsicion repair cross-complement group 1,ERCC 1)、DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalyticsubunit,DNA-PKcs)作为重要的DNA修复因子,可以修复DNA链内交联及DNA双链断裂损伤,与卵巢癌、食管癌及胃癌等的发病有关,而且均与肺癌主要化疗药顺铂的耐药及肿瘤的放疗敏感性降低有关,二者共同在肺癌中的表达情况及作用机制的研究国内外均未见报道。本研究拟采取组织芯片技术及免疫组化SP法检测ERCC1、DNA-PKcs在非小细胞肺癌中的表达,探讨二者在肺癌发生发展及预后中的作用,以期为肺癌的个体化治疗、预后判定提供有价值的分子检测指标。材料和方法1、病例和标本收集中国医科大学附属一院1997年2月—2000年9月间手术切除并经病理确诊的非小细胞肺癌石蜡标本116例,男性85例,女性31例,中位年龄为57.5岁;所有病例术前均未接受过放化疗及免疫治疗,随访时间截至2005年9月;取其中12例癌旁正常肺组织作为对照。2、试剂浓缩型鼠抗人ERCC1、DNA-PKcs单克隆抗体均购自美国Neomarkers公司,工作浓度为1:100;SP检测试剂盒和DAB显色液均购自福州迈新生物技术有限公司。3、方法应用组织芯片技术和免疫组化SP法检测肺癌组织及癌旁正常肺组织中ERCC1和DNA-PKcs的表达。组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作;染色方法按SP免疫组化试剂盒说明书进行,ERCC1和DNA-PKcs经柠檬酸(PH=6.0)微波抗原修复。4、结果判定ERCC1、DNA-PKcs以胞核中出现明显的棕黄色颗粒定为阳性染色。每个组织点随机选取5个高倍视野(×400),计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞数。不着色或阳性细胞数≤10%定为阴性,阳性细胞数＞10%定为阳性,每例均取两点的平均值。5、统计分析方法采用SPSS13.0统计软件进行数据分析处理,各组间率的比较采用卡方检验。生存数据分析采用Kaplan—Meier法,采用双侧检验,P＜0.05为具有统计学意义。实验结果1、ERCC1、DNA-PKcs在NSCLC及正常肺癌组织中的表达ERCC1、DNA-PKcs在116例NSCLC组织中的阳性表达率分别为40.5%、75.0%,ERCC1在肺癌组织和癌旁正常组织的表达无统计学差异(P=0.129),而DNA-PKcs在癌组织中的表达明显高于癌旁正常肺组织(P=0.000)。2、ERCC1、DNA-PKcs表达与患者一般状况及临床病理特征的关系ERCC1的表达与肺癌分化程度、T分期和临床分期呈负相关(P＜0.05),但与患者的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移等无关(P＞0.05)。DNA-PKcs的表达与临床病理特征均无关。3、ERCC1、DNA-PKcs表达的相关性ERCC1、DNA-PKcs表达之间存在正相关(r=0.274,P=0.003)。4、ERCC1、DNA-PKcs表达与预后的关系预后较好的患者ERCC1的表达水平有高于预后较差者的趋势,差异有统计学意义(P=0.014)。DNA-PKcs的表达与预后无关(P＞0.05)多因素分析示ERCC1、DNA-PKcs不是影响预后的独立危险因素。结论1、分化程度高、肿瘤小和生存期长者,ERCC1相对高表达,所以ERCC1的检测对预后评估有一定的指导价值2、DNA-PKcs在肺癌组织中高表达,但与细胞增殖及恶性转化的关系尚不确定3、ERCC1、DNA-PKcs表达之间呈正相关