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背景和目的：
心脑血管疾病是造成全人类死亡率较高的疾病之一。据统计，截止至2015年，全球有三分之一的人死于心血管疾病。动脉粥样硬化（Atheroserosis,AS）是心血管疾病发生的主要诱因，它是一种发生在动脉血管壁以脂质代谢为特征的慢性炎症性血管疾病。血管内皮细胞（Endothelial cell,EC）位于血管壁的最内层，起着维持血管生理结构和生物学功能的重要作用。当血管内皮细胞的形态结构受损后，血管屏障功能也因此受到损害，进而引发内皮细胞功能障碍，这也是导致AS发生的初始诱因。
在AS病变发展的过程中，自始至终都有各种炎症细胞及大量炎症介质的参与。当内皮屏障功能受损后，多种促炎因子被大量释放，如趋化因子白介素-8（Interleukin-8,IL-8）。研究证明IL-8可以促进单核细胞向内皮细胞的粘附，并能促进平滑肌细胞的增殖和迁移，进而引发AS的炎症反应，最终导致氧化及血栓形成。然而，由于IL-8在免疫调节中同样扮演重要角色，IL-8抑制剂对于AS疾病的应用并没有展现出较好的治疗效果，反而产生了许多不良作用。因此，将IL-8引起动脉粥样硬化的信号通路具体化，揭示更多治疗AS的靶点则变得更有意义。
MicroRNA（miRNA）是进化保守的非编码小RNA。近年来的研究表明，miRNA在AS疾病的生理病理过程中具有关键作用，miRNA的抑制剂能够较好地干预AS的发生发展。miR-1290是一种特殊的miRNA，在许多肿瘤及癌症疾病中均表达异常，如胶质细胞瘤、卵巢癌、肺腺癌和食管鳞状细胞癌等等。目前，在我们的研究中发现，高脂血症患者血清中miR-1290的表达量升高，这表明miR-1290可能是一种与AS相关的新型miRNA。因此，选择具有促动脉粥样硬化活性的IL-8作为诱导剂，探究在炎症状态下miR-1290在AS疾病中的作用，并试图探索miR-1290与IL-8介导的ECs的相关性，为AS疾病提供新的治疗靶点。
方法：
第一部分
1.采用q-PCR方法检测高脂血症患者血清和不同刺激剂诱导下内皮细胞中的miR-1290表达情况；
2.通过细胞粘附实验、Western Blot和MTT方法，检测IL-8对HUVECs粘附、增殖功能及相关分子表达的影响；
3.利用细胞粘附及Western Blot实验检测miR-1290对内皮细胞粘附功能的影响；4.采用Western Blot实验，通过上调和敲降miR-1290后，检测GSK-3β的表达；5.通过Western Blot和q-PCR技术，检测IL-8对GSK-3β表达的影响；
6.利用细胞粘附实验、Western Blot和MTT方法检测si-GSK-3β对HUVECs粘附及增殖功能的影响。
第二部分
1.通过使用生物信息学软件（miRDB、TargetScan）预测miR-1290与GSK-3β基因3UTR区的潜在结合位点；
2.通过PCR实验扩增GSK-3β基因3UTR区片段；
3.构建野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体；
4.采用菌落PCR、双酶切及基因测序方法鉴定重组载体；
5.使用PE多功能酶标仪检测双荧光素酶活性。
结果：
第一部分
1.miR-1290在高脂血症患者血清和IL-8诱导的ECs中高表达；
2.IL-8促进HUVECs的增殖及其与单核细胞之间的粘附功能，并促进了粘附相关分子（ICAM-1、VCAM-1）及增殖相关分子（cyclinD1、PCNA）的表达；
3.miR-1290通过调节ICAM-1和VCAM-1的表达，促进内皮细胞与单核细胞之间的粘附；
4.miR-1290负向调控GSK-3β的表达；
5.GSK-3β在IL-8诱导的HUVECs中低表达；
6.si-GSK-3β促进内皮细胞的粘附，抑制其增殖。
第二部分
1.生物信息学软件预测结果显示，在GSK-3β基因3UTR区有两个miR-1290潜在的结合位点；
2.菌落PCR、双酶切和基因测序结果显示，两个结合位点的野生型和突变型重组载体构建成功；
3.miR-1290通过靶向结合第二个结合位点，抑制野生型重组载体的荧光素酶活性。
结论：
1.高脂血症患者血清中miR-1290的表达量增加。
2.miR-1290在IL-8诱导的人脐静脉内皮细胞中高表达。
3.miR-1290通过靶向GSK-3β诱导粘附因子ICAM-1、VCAM-1的表达，促进内皮细胞与单核细胞之间的粘附。
心脑血管疾病是造成全人类死亡率较高的疾病之一。据统计，截止至2015年，全球有三分之一的人死于心血管疾病。动脉粥样硬化（Atheroserosis,AS）是心血管疾病发生的主要诱因，它是一种发生在动脉血管壁以脂质代谢为特征的慢性炎症性血管疾病。血管内皮细胞（Endothelial cell,EC）位于血管壁的最内层，起着维持血管生理结构和生物学功能的重要作用。当血管内皮细胞的形态结构受损后，血管屏障功能也因此受到损害，进而引发内皮细胞功能障碍，这也是导致AS发生的初始诱因。
在AS病变发展的过程中，自始至终都有各种炎症细胞及大量炎症介质的参与。当内皮屏障功能受损后，多种促炎因子被大量释放，如趋化因子白介素-8（Interleukin-8,IL-8）。研究证明IL-8可以促进单核细胞向内皮细胞的粘附，并能促进平滑肌细胞的增殖和迁移，进而引发AS的炎症反应，最终导致氧化及血栓形成。然而，由于IL-8在免疫调节中同样扮演重要角色，IL-8抑制剂对于AS疾病的应用并没有展现出较好的治疗效果，反而产生了许多不良作用。因此，将IL-8引起动脉粥样硬化的信号通路具体化，揭示更多治疗AS的靶点则变得更有意义。
MicroRNA（miRNA）是进化保守的非编码小RNA。近年来的研究表明，miRNA在AS疾病的生理病理过程中具有关键作用，miRNA的抑制剂能够较好地干预AS的发生发展。miR-1290是一种特殊的miRNA，在许多肿瘤及癌症疾病中均表达异常，如胶质细胞瘤、卵巢癌、肺腺癌和食管鳞状细胞癌等等。目前，在我们的研究中发现，高脂血症患者血清中miR-1290的表达量升高，这表明miR-1290可能是一种与AS相关的新型miRNA。因此，选择具有促动脉粥样硬化活性的IL-8作为诱导剂，探究在炎症状态下miR-1290在AS疾病中的作用，并试图探索miR-1290与IL-8介导的ECs的相关性，为AS疾病提供新的治疗靶点。
方法：
第一部分
1.采用q-PCR方法检测高脂血症患者血清和不同刺激剂诱导下内皮细胞中的miR-1290表达情况；
2.通过细胞粘附实验、Western Blot和MTT方法，检测IL-8对HUVECs粘附、增殖功能及相关分子表达的影响；
3.利用细胞粘附及Western Blot实验检测miR-1290对内皮细胞粘附功能的影响；4.采用Western Blot实验，通过上调和敲降miR-1290后，检测GSK-3β的表达；5.通过Western Blot和q-PCR技术，检测IL-8对GSK-3β表达的影响；
6.利用细胞粘附实验、Western Blot和MTT方法检测si-GSK-3β对HUVECs粘附及增殖功能的影响。
第二部分
1.通过使用生物信息学软件（miRDB、TargetScan）预测miR-1290与GSK-3β基因3UTR区的潜在结合位点；
2.通过PCR实验扩增GSK-3β基因3UTR区片段；
3.构建野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体；
4.采用菌落PCR、双酶切及基因测序方法鉴定重组载体；
5.使用PE多功能酶标仪检测双荧光素酶活性。
结果：
第一部分
1.miR-1290在高脂血症患者血清和IL-8诱导的ECs中高表达；
2.IL-8促进HUVECs的增殖及其与单核细胞之间的粘附功能，并促进了粘附相关分子（ICAM-1、VCAM-1）及增殖相关分子（cyclinD1、PCNA）的表达；
3.miR-1290通过调节ICAM-1和VCAM-1的表达，促进内皮细胞与单核细胞之间的粘附；
4.miR-1290负向调控GSK-3β的表达；
5.GSK-3β在IL-8诱导的HUVECs中低表达；
6.si-GSK-3β促进内皮细胞的粘附，抑制其增殖。
第二部分
1.生物信息学软件预测结果显示，在GSK-3β基因3UTR区有两个miR-1290潜在的结合位点；
2.菌落PCR、双酶切和基因测序结果显示，两个结合位点的野生型和突变型重组载体构建成功；
3.miR-1290通过靶向结合第二个结合位点，抑制野生型重组载体的荧光素酶活性。
结论：
1.高脂血症患者血清中miR-1290的表达量增加。
2.miR-1290在IL-8诱导的人脐静脉内皮细胞中高表达。
3.miR-1290通过靶向GSK-3β诱导粘附因子ICAM-1、VCAM-1的表达，促进内皮细胞与单核细胞之间的粘附。