CG8419基因(脊椎动物同源基因为TRIM45)是我室克隆鉴定的一个调控造血干细胞发育候选基因。生物信息学分析表明,该基因具有环型锌指、B盒型锌指、螺旋卷曲螺旋结构域(三元模体)和IG-FLMN蛋白结构域。我室之前的研究提示,CG8419基因可能与造血细胞的发育相关。提取野生型成虫果蝇的RNA,反转录成cDNA,设计引物克隆果蝇CG8419基因,将扩增的基因与pMD18-T克隆载体相连,构建成pMD18-T-CG8419质粒,经EcoRI和Xhol酶切处理,将pMD18-T-CG8419克隆质粒中的CG8419基因转入pUAST表达载体,构建成pUAST-CG8149转基因重组质粒,将pUAST-CG8419重组质粒和p△2-3转座酶质粒共同显微注射野生型白眼果蝇0h-0.5h受精胚胎,在子代通过mini-white标记(橙眼)筛选建立了8个转基因果蝇品系。为了检测CG8419基因在其转基因品系中的插入位点,分别将8个转基因品系与2号染色体平衡系sco/cyo及2号,3号双平衡系sco/cyo; TM6/TM3杂交,结果出现了表型为sco/cyo的转基因纯合子,表明CG8419基因插入在果蝇的3号染色体上。为了检测每一个转基因品系中CG8419基因的表达情况,将纯合的转基因品系与Actin5c-GAL4品系分别杂交,收集子代0h-12h胚胎,提取蛋白并进行Western Blot检测,结果显示在2号品系中CG8419蛋白的表达教野生型果蝇有显著增加。为了研究CG8419基因过表达时能否导致血细胞增多,将8个转基因品系纯合体与W*;He-GFP品系杂交,在荧光显微镜下观察杂交后子代幼虫的血细胞分布,结果显示2号品系体内血细胞明显增多。制备血液标记基因mrj多克隆抗体并检测CG8419转基因品系中mrj表达,发现在CG8419转基因品系中mrj表达量上调。总之,本文成功构建了8个CG8419基因转基因果蝇品系,确认了转基因的染色体位点,整合在基因组中的CG8419基因在转基因果蝇品系中能过量表达, CG8419基因的过表达能导致果蝇体内血细胞增多,表明CG8419基因与果蝇的血液发育有关。