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化疗作为临床常用的肿瘤治疗有效手段,由于明显的毒副作用,限制其长期应用。双歧杆菌是人和动物肠道内重要的生理菌,其表面分子脂磷壁酸已被证实具有抗肿瘤和免疫增强的作用,但与化疗联合能否增强抗肿瘤作用同时缓解化疗毒副作用及其机制并不是很清楚。本实验通过建立H22肝癌荷瘤小鼠动物模型,观察双歧杆菌脂磷壁酸(Lipoteichoic acid of Bifidobacterium , BLTA)与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)联用后的治疗效果,以及BLTA对5-FU化疗毒副作用的改善和对机体的免疫调节作用,并进一步探讨其作用机制,为提高抗肿瘤治疗的临床疗效提供实验和理论基础。实验中采用双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU处理H22荷瘤Balb/c小鼠,定期测量肿瘤大小,观察各组小鼠一般状况;计算抑瘤率、外周血红细胞数和白细胞数,取脾脏和胸腺计算脏器指数;HE染色分析肿瘤组织学变化;MTT法检测各组小鼠脾T淋巴细胞增殖转化能力以及NK细胞和CTL杀伤活性;ELISA法检测各组小鼠脾T淋巴细胞分泌IFN-γ含量;流式细胞仪检测各组小鼠脾细胞中淋巴细胞亚群比例;用RT-PCR和Western blot方法分别检测各组小鼠肿瘤组织Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白的表达变化。实验结果显示:双歧杆菌脂磷壁酸及5-FU单独应用均可抑制肿瘤生长,但单独5-FU处理组小鼠一般状况差,毒性反应重;BLTA与5-FU联合应用,与单独5-FU处理组比较,不仅抑瘤率明显提高,且荷瘤小鼠一般状况改善,白细胞数升高,脏器指数增加,在一定范围内呈剂量依赖性。光镜观察HE染色肿瘤组织,BLTA处理组可见大量淋巴细胞浸润。荷瘤小鼠脾细胞中CD4+CD25+Treg比例高,肿瘤组织高表达Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白,经BLTA或5-FU处理后CD4+CD25+Treg比例下降,Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白表达水平也均呈下调趋势,而二者联合处理后CD4+CD25+Treg比例降低更明显,Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白表达水平也明显下调(P值均<0.01)。但5-FU单独处理后的小鼠脾T淋巴细胞增殖能力差,脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平低,脾细胞中CD4+细胞数量也减少,NK细胞和CTL杀伤率均降低,而BLTA处理后小鼠脾T淋巴细胞增殖能力强,脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平提高,CD4+细胞数量明显增加,NK细胞和CTL杀伤率明显提高。实验结果表明:双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU能增强化疗的抑瘤作用,并能缓解化疗引起的免疫低下现象,起到增效减毒作用。其作用机制之一可能是双歧杆菌脂磷壁酸可通过抑制TIM-3/TIM-3L途径,降低荷瘤小鼠CD4+CD25+Treg数量和免疫抑制活性,进而增强T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ能力,促进NK细胞和CTL杀伤活性,提高宿主自身抗肿瘤免疫来缓解化疗药物对免疫系统的损害,增强宿主对化疗的耐受性,从而提高化疗抗肿瘤作用效果。