T7噬菌体因其具有的结构简单,操作方便等特点,作为噬菌体表面展示技术的载体之一,能够快速方便的用于抗原、抗体的筛选,被广泛应用于兽医研究的各个领域。本研究以T7噬菌体裂解机理为基础,通过构建缺失裂解调控基因穿孔素（Holin）的重组T7噬菌体（T7-△Holin）,来探究T7噬菌体裂解周期与子代病毒粒子产量之间的对应关系,通过建立荧光定量评价方法、优化培养过程工艺参数,最终确定Holin缺失株T7噬菌体高效培养方法,为大规模、低成本生产T7噬菌体奠定基础。实验一,通过PCR方法拼接缺失Holin基因的T7噬菌体基因组,并构建表达Holin蛋白的补偿宿主用于拯救缺失株T7-△Hilon重组噬菌体。PCR扩增Holin基因,分别在基因的5’端添加Xba I和RBS序列、3’端添加BamH I位点,然后插入pET-28载体构建重组质粒pET-Holin。将重组质粒化学转化法导入大肠杆菌BL-21（DE3）,构建补偿宿主菌BL-Holin。IPTG诱导Holin蛋白表达,SDS-PAGE鉴定目的蛋白。分析T7噬菌体全基因组,选择Holin基因上游Sfi I位点以及下游非编码区作为分段位点。酶切回收Sfi I位点左侧基因组、SOE-PCR方法扩增缺失SfiI到非编码区基因片段、常规PCR扩增非编码区右侧基因组,包装蛋白包装三者的连接产物并在补偿宿主中拯救T7-△Holin重组噬菌体。结果显示,构建的补偿宿主能够正确表达Holin蛋白,并能在其中顺利拯救T7-△Holin重组噬菌体,测序结果表明Holin基因被正确敲除,缺失株噬菌体能够稳定传20代,显示出良好的遗传稳定性。实验二,由于传统斑计数法评价噬菌体颗粒数量存在效率低、通量小、结果不准确等缺点,为了更好的研究T7-△Holin的生物学特性,建立了基于qRT-PCR的噬菌体颗粒评价方法。首先通过梯度密度离心方法进行了T7噬菌体样品的纯化,将纯化T7噬菌体样品进行倍比稀释作为模板,通过qRT-PCR建立起标准曲线,得到CP值与T7-△Holin纯化样品浓度之间的关系方程。用相同样品倍比稀释后测定吸光度,通过已知的公式用吸光度值计算出样品中噬菌体的颗粒数,得到样品浓度与样品中颗粒数之间的关系。将其中浓度通过第一个方程换算成CP值,即可得到CP值与样品中颗粒数之间的关系方程,作图显示建立的CP值-颗粒数方程具有良好的线性关系。本实验建立的评价方法可以通过qRT-PCR快速准确高通量地对待测样品中噬菌体颗粒数进行评价。实验三,通过改变MOI及IPTG条件,并分时采样绘制生长曲线的方式比对了T7-△Holin与T7Select415-1b在生长速率、裂解时间及子代产量方面的区别。通过比对发现,在MOI>1的情况下,T7-△Holin的生长速率相对T7Select415-1B较慢,裂解时间推迟约半小时,而子代颗粒数比T7Select415-1b提高约5倍。当MOI<1时,T7-△Holin的裂解时间在随着MOI的降低而推迟,MOI为10^-5时,T7Select415-1b培养4h后完全裂解,而T7-△Holin培养5h后没有明显裂解现象。低MOI下T7-△Holin的子代产量则与T7Select415-1b基本持平。同时研究结果还显示,改变IPTG的浓度及添加时间对T7-△Holin的生长和裂解时间没有影响。用RNase及DNase处理样品并对处理前后样品分别进行评价,结果显示核酸酶处理前后qRT-PCR评价结果会有所差异。T7Select415-1b处理前评价结果最高比处理后高两个滴度左右,而T7-△Holin前后相差最大为一个滴度左右。经过长时间培养的样品核酸酶处理前后评价结果则趋于一致,显示了T7噬菌体裂解过程中的子代颗粒不完全包装即被释放的情况。