茶树是一种不耐低温的经济作物,低温限制其引种、栽培,倒春寒会造成春茶减产甚至无收。CBF基因是植物抗冷途径的枢纽,在植物低温应答中具有重要作用。本实验从茶树中克隆并鉴定2个新的CsCBF基因,研究其表达模式,构建植物双元表达载体PBI121-CsCBF并转化烟草,结果如下:1.基于转录组数据克隆茶树两个新CBF基因完整开放阅读框(CsCBF3,登录号为:MH017428;CsCBF5,登录号为:MH165878),CsCBF3开放阅读框长度为783 bp,编码261个氨基酸,分子量为28.06 kDa;CsCBF5开放阅读框长度为744 bp,编码248个氨基酸,分子量为27.16 kDa。2.CsCBF基因家族中5个基因都不含有内含子,CsCBF1、CsCBF4在不同品种间无单碱基突变(SNP),序列保持一致;CsCBF2、CsCBF3、CsCBF5含有4、8、6个突变位点,突变率分别为1/180 bp、1/98 bp、1/124 bp。3.克隆出CsCBF基因家族中5个基因启动子。CsCBF启动子都含有MYC、逆境、激素、光响应元件。其中光反应元件比例较大。4.CsCBF基因家族中4个基因(CsCBF1、CsCBF2、CsCBF3、CsCBF5)均响应低温胁迫,最大表达量与时间有关。抗寒性强的品种“舒茶早”高于抗寒性弱的品种“英红九号”。冷驯化处理具有同样规律,且14 d的最大表达量高于低温胁迫。5.CsCBF基因家族中CBF4响应PEG渗透胁迫。表达量在3 h达到最高,“舒茶早”品种表达量高于“英红九号”。6.CsCBF基因在茶树不同组织的表达存在差异,CsCBF1、CsCBF3、CsCBF5在老叶中表达量最高,CsCBF2、CsCBF4在嫩叶中表达量最高,在根中表达不明显。7.获得CsCBF2、CsCBF5转基因烟草植株。正常生长下CsCBF2、CsCBF5可以过量表达,低温处理下进一步提高两个基因的表达水平。