目的:脑血管病已成为我国首要致残因素。脑梗死后继发性脑损伤可加重脑梗死所致的神经功能障碍,导致继发性脑损伤的原因主要有炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、细胞激酶、自由基以及兴奋毒性物质释放等。凋亡是细胞程序性死亡,是细胞主动的死亡过程,是神经元死亡的一个重要机制,在脑梗死的进程中发挥重要作用。水飞蓟宾是多酚黄酮类化合物,具有多种生物学效应,如抗炎症反应、抗氧化应激、调节线粒体功能和减少细胞凋亡,广泛应用于肝炎、肿瘤。表皮生长因子受体(EGFR)是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一,EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面,EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。近来研究表明水飞蓟宾可以影响EGFR表达以影响细胞的增殖与凋亡。但有关水飞蓟宾在脑梗死急性期的神经保护作用及机制的研究很少。本实验成功建立了小鼠永久性大脑中动脉闭塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)模型,并应用水飞蓟宾进行干预,观察水飞蓟宾对脑梗死的保护作用及其对凋亡和EGFR/ERK信号通路的影响。方法:本实验分为两部分:第一部分研究水飞蓟宾的脑保护作用;第二部分研究不同剂量水飞蓟宾对缺血后脑组织p-EGFR/EGFR,p-ERK/ERK,Bcl2,Bax,cleaved-caspase3表达的影响。实验一:成年雄性CD-1小鼠制备永久性大脑中动脉梗塞(p MCAO)模型。随机将成年雄性CD-1小鼠分成5组:假手术组(Sham组),大脑中动脉梗塞组(p MCAO+0.9%氯化钠),低剂量水飞蓟宾组(p MCAO+水飞蓟宾50 mg/kg),中剂量水飞蓟宾组(p MCAO+水飞蓟宾100 mg/kg)和高剂量水飞蓟宾组(p MCAO+水飞蓟宾200 mg/kg)。水飞蓟宾在大脑中动脉梗塞模型建立前30分钟经胃给药。模型建立24小时后评估梗塞体积和水肿程度,并在24小时、72小时进行脑组织尼氏染色观察;实验二:western blot和免疫组织化学染色测定梗死后24小时、72小时p-EGFR/EGFR,p-ERK/ERK,cleaved-caspase3,Bcl-2和Bax的表达。结果:1脑梗死体积的测定(%HLV):Sham组无梗死灶。与p MCAO组比较,水飞蓟宾中剂量组和高剂量组明显降低了梗死体积(p MCAO vs.Silibinin-M and Silibinin-H:59.28%±2.92%vs.43.08%±5.14%and43.77%±5.05%,P<0.05)。而低剂量组梗塞体积虽小于p MCAO组,但未见显著差异(p MCAO vs.Silibinin-L:59.28%±2.92%vs.47.79%±5.31%,P>0.05)。2脑组织含水量测定:水飞蓟宾中剂量组水肿程度明显小于p MCAO组,差异有统计学意义(p MCAO vs.Silibinin-M:86.94%±0.61%vs.84.81%±0.79%,P<0.05)。水飞蓟宾低剂量组和高剂量组水肿体积无明显减小(p MCAO vs.Silibinin-L and Silibinin-H:86.94%±0.61%vs.86.11%±0.48%and 86.93%±0.38%,P>0.05)。3尼氏染色:与Sham相比,p MCAO尼氏小体数明显下降。水飞蓟宾中剂量组明显缓解尼氏小体阳性细胞数下降程度,与p MCAO相比,结果有统计学差异。(24 h:p MCAO vs.Silibinin-M:9.4±0.23 vs.14.4±2.25,P<0.05;72 h:p MCAO vs.Silibinin-M:7.4±0.70 vs.15.53±1.27,P<0.05)。4水飞蓟宾对p-EGFR/EGFR,p-ERK/ERK,cleaved-caspase3,Bcl-2和Bax表达的影响。Western blotting结果显示:术后24 h和72 h,与p MCAO组相比,水飞蓟宾中剂量组明显上调p-EGFR/EGFR,p-ERK/ERK和Bcl-2水平,下调Bax和cleaved-caspase3(P<0.05)。术后24 h,水飞蓟宾低剂量组和高剂量组明显降低Bax和cleaved-caspase3水平(P<0.05),同时高剂量组明显上调p-EGFR/EGFR水平(P<0.05)。术后72 h,水飞蓟宾低剂量组和高剂量组明显上调p-ERK/ERK(P<0.05),下调cleaved-caspase3(P<0.05),同时高剂量组明显下调Bax表达(P<0.05)。5免疫组织化学染色显示:用药组(中剂量组)在术后24 h和72 h均明显上调了p-EGFR(24 h:p MCAO vs.Silibinin-M:15.15±0.41 vs.20.87±1.90,P<0.05;72 h:p MCAO vs.Silibinin-M:15.0±1.38 vs.21.1±1.45,P<0.05),p-ERK(24 h:p MCAO vs.Silibinin-M:16.1±1.42 vs.27.3±2.1,P<0.05;72 h:p MCAO vs.Silibinin-M:19.82±2.48 vs.27.43±0.49,P<0.05)的表达水平,下调了cleaved-caspase3(24 h:p MCAO vs.Silibinin-M:31.0±1.19 vs.18.3±0.7,P<0.05;72 h:p MCAO vs.Silibinin-M:30.25±0.90 vs.13.35±1.90,P<0.05)的表达水平,差异有统计学意义。结论:水飞蓟宾明显减少脑梗死体积,减轻梗死后脑水肿,增加了尼氏染色阳性细胞数,上调p-EGFR/EGFR,p-ERK/ERK,Bcl-2水平,下调Bax,cleaved-caspase3。本实验证实水飞蓟宾的脑保护作用是由EGFR/ERK介导的抗凋亡过程实现的,为水飞蓟宾的临床应用提供了理论基础。