目的本课题从脑缺血再灌注后不同时间点手术组大鼠的神经功能缺损、脑组织含水量、脑组织病理改变以及神经元标志物NSE、血管内皮细胞标志物CD31免疫组化观察等方面的动态变化,观察大鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤的特点,揭示其变化规律;通过大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植组、脑脉一号中药组及其联合治疗组对上述变化的影响,讨论脑脉一号联合干细胞移植对缺血再灌注大鼠的保护作用及治疗机制。方法采用雄性SD大鼠,155只,体重250g—320g,分组:大鼠根据处理因素分为假手术组和手术组,手术组包括模型组、骨髓间充质干细胞移植组、脑脉一号中药组、联合治疗组。假手术为8只,其余各组24只。手术组根据取材时间点不同又随机分为3d、7d、14d组,每组每个时间点各8只。全骨髓贴壁培养法体外分离、培养大鼠骨髓基质干细胞,倒置相差显微镜下逐日观察细胞形态及生长状况。术前3天脑脉一号中药组和联合治疗组给予脑脉一号(1.5g/kg/d)灌胃,假手术组、模型组和移植组给以等量的生理盐水灌胃,每日一次;灌胃第3天参照改良的Longa’s制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血动物模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),术后2小时缓慢拔出栓线3-4mm进行缺血后再灌注;再灌注后24小时移植组和联合组大鼠纹状体通过立体定向仪注以10μl(1×10~4/ml)BMSCs,共1×10~4个细胞;移植后联合组大鼠给予脑脉一号中药灌胃,移植组大鼠给予等量的生理盐水。测定大鼠3d、7d、14d神经评分,取部分脑组织用做测定脑组织含水量,在光镜下观察缺血区病理改变:免疫组织化学法检测CD31阳性细胞表达和NSE阳性细胞表达。结果1、手术组出现不同程度的病理损伤,随着时间的推移,病理损伤程度有所减轻。BMSCs移植组、脑脉一号组、联合治疗组分别较模型组神经功能恢复明显,脑组织含水量减轻明显,病理组织受损程度减轻,体重增长率明显增加。但联合治疗组的作用效果比较单独脑脉一号组没有显著差异。2、神经元标志物NSE表达的变化:BMSCs移植组、脑脉一号组分别较模型组NSE表达明显。联合治疗组能显著增加NSE表达,且其联合作用比较单独BMSCs移植组和脑脉一号组有显著增加。3、各组大鼠脑组织内CD31细胞表达的变化:BMSCs移植组、脑脉一号组、分别较模型组CD31表达增加明显。联合治疗组能显著增加CD31表达,但其联合作用与脑脉一号比较并无显著增加。结论1、脑缺血再灌注后可造成大鼠脑组织的病理损伤明显,表现为神经形态学改变、脑组织含水量增加、微血管结构破坏,以3d最为严重,至14d损伤仍维持在一个较高的水平。2、脑脉一号具有促进BMSCs在脑组织内的存活及向血管内皮细胞分化的作用,故其联合用药时,血管再生数量明显增多。促微血管再生可能是其脑保护机制之一。3、虽然多因素方差分析表明脑脉一号随着时间的推移能显著降低脑组织含水量,脑脉一号中药复方促进了BMSCs移植治疗局灶性脑缺血大鼠的血管再生,神经细胞得到保护,但仍未达到促进神经功能明显改善的效果。其原因可能与观察的时间过短有关。