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研究目的：探究诱导滑膜来源的间充质干细胞（synovial-deprived mesenchymal stemcells, SMSCs）成软骨分化的最佳细胞因子组合；在最佳细胞因子组合诱导SMSCs成软骨分化的基础上，探究SMSCs成软骨分化过程中microRNAs（miRNAs）的表达谱系；通过构建SMSCs过表达miRNA体系，进而探讨miRNA对SMSCs成软骨分化的影响。研究方法：1、取新西兰大白兔膝关节处滑膜组织，按照Pei等的方法分离培养滑膜组织干细胞，并通过形态学观察、细胞表面抗原检测以及成脂、成骨、成软骨诱导分化对分离的滑膜组织干细胞进行鉴定。2、采用成软骨PELLET系统培养，将聚丙烯管中离心的SMSCs团块分成8组，各组分别加入转化生长因子-β3（transforminggrowth factor-β3,TGF-β3）、骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2, BMP-2）、地塞米松（dexamethasone, DXM）不同组合的诱导因子进行成软骨诱导分化培养。诱导21天后，通过比较各组软骨微球的直径、重量，蛋白聚糖(PG)、II型胶原的表达，以及软骨标志基因的表达水平来评价各组因子诱导SMSCs成软骨分化能力的大小，确定最佳诱导SMSCs成软骨细胞因子组合。3、取传代培养后的SMSCs，在全培养基培养基础上将其分成两组：实验组加入TGF-β3、BMP-2及DXM，对照组不加上述诱导因子。在SMSCs成软骨分化的第7d、14d、21d，采用微阵列基因芯片技术分析成软骨分化过程中miRNAs的表达情况，并采用实时定量PCR（RT-PCR）技术对差异表达的miRNAs进行验证。在实验组的基础上，将SMSCs又分为A、B两组：A组为实验组，转染miR-218mimics使其过表达，B组为对照组，转染mimics-NC，从而验证过表达miR-218对SMSCs成软骨分化的影响。结果：1、流式细胞仪对分离的滑膜干细胞细胞鉴定结果显示：软骨特异性表面抗原CD44、CD90呈阳性表达，油红O（Oil-red O）染色及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色结果示阳性，说明分离出的干细胞具有间充质干细胞特异性表型，且具有多向分化潜能。2、在不同细胞因子组合条件下诱导SMSCs成软骨分化的研究中，以TGF-β3、BMP-2及DXM细胞因子联合诱导产生的软骨微球直径最大，重量最重，且PG及Ⅱ型胶原合成量亦最多；定量RT-PCR结果亦显示该组合诱导条件下软骨相关基因的表达水平最高（P<0.01）。3、基因芯片技术筛选出了SMSCs成软骨分化过程中相对于对照组表达差异在2倍以上的miRNAs共16个，其中表达上调的有9个，表达下调的有7个。采用RT-qPCR方法对表达上调的miR-340和miR-140以及下调的miR-21和miR-132进行验证，结果显示RT-qPCR与基因芯片的结果一致，说明本研究中芯片检测结果真实可靠。实验组转染miR-218mimics使其过表达结果显示，软骨细胞特异性细胞质成分GAG较对照组明显减少。结论：1、按照Pei等的方法可以成功的从兔膝关节滑膜组织中分离出干细胞，分离出的滑膜干细胞具有MSCs特异性表型，且具有多向分化潜能。2、SMSCs在TGF-β3、BMP-2及DXM三者联合诱导条件下成软骨分化能力最强。3、SMSCs成软骨分化过程中有诸多miRNAs参与调节，过表达miR-218可以明显抑制SMSCs的成软骨过程。