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体内活性物质牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic Acid，TCDCA)作为胆汁酸的主要有效成分之一，具有显著地抗炎免疫调节作用。为了深入探讨TCDCA的抗炎免疫调节作用的分子机制。本文分析了TCDCA对TGR5介导的信号通路中cAMP含量的影响。其主要研究内容如下: (1) NR8383细胞TGR5基因阻断模型建立的研究 采用阳离子脂质体法，将TGR5 siRNA转染到NR8383细胞中。实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测了NR8383细胞中TGR5 mRNA和蛋白表达。结果显示，转染TGR5 siRNA组NR8383细胞上的TGR5 mRNA和蛋白的表达显著低于对照组（P＜0.01），TGR5 siRNA的沉默率可达80％。 (2)稳定表达TGR5受体NR8383细胞系的建立 将构建的真核表达质粒pcMV-TGR5转染至NR8383细胞，加入G418筛选了表达TGR5的NR8383细胞系，采用实时荧光定量PCR、Western Blot及免疫荧光技术检测了NR8383细胞系中TGR5的表达。结果显示，建立的NR8383细胞系中能够稳定表达TGR5。 (3) TCDCA对TGR5受体基因沉默及稳定表达的NR8383细胞中cAMP含量的影响 采用ELISA法分别检测了TCDCA作用后TGR5基因阻断的NR8383细胞(TGR5-/-)及稳定表达TGR5受体的NR8383细胞中cAMP的含量。结果表明:一定剂量（浓度）的TCDCA能够使转染TGR5受体的NR8383细胞产生cAMP。加之不同浓度的TCDCA刺激低表达TGR5受体的NR8383和TGR5受体沉默的NR8383细胞后，均未显著影响这2种细胞中的cAMP含量，因而提示，TCDCA诱导NR8383-TGR5细胞内cAMP水平升高的效应与其激动TGR5有关。 (4) TCDCA对AC阻断后NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的影响 通过ELISA法检测了TGR5受体介导的AC-cAMP信号通路中AC被阻断后，TCDCA对稳定表达TGR5受体的NR8383细胞中cAMP的含量。结果显示，在AC特异性抑制剂SQ22，536抑制NR8383-TGR5中的AC活性后，不同浓度的TCDCA对NR8383-TGR5细胞中cAMP的含量均无显著影响。提示TCDCA对NR8383-TGR5细胞内cAMP水平的影响，与AC的活性有关。 (5) TCDCA对PDE4阻断后NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的影响 通过ELISA法检测了TGR5受体介导的AC-cAMP信号通路中PDE4被阻断后，TCDCA对稳定表达TGR5受体的NR8383细胞中cAMP的含量。结果显示，在PDE4特异性抑制剂Rolipram抑制PDE活性后，NR8383-TGR5细胞内cAMP水平蓄积的基础上，10μM及100μM浓度的TCDCA仍均能极显著的提高cAMP的含量。提示，TCDCA引起NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的增加，与其激动TGR5，参与了AC-cAMP信号通路有关。 本实验研究的主要结论如下: (1)通过RNA干扰技术成功建立了NR8383大鼠肺泡巨噬细胞TGR5基因阻断模型; (2)成功建立了稳定表达TGR5基因的NR8383细胞系; (3)TCDCA对低表达TGR5受体的NR8383和TGR5受体沉默的NR8383细胞中的cAMP含量均未产生显著影响;TCDCA降低NR8383-TGR5细胞内cAMP的含量，与TGR5受体介导的AC-cAMP信号通路中AC的活性受到抑制有关;TCDCA能够提高NR8383-TGR5细胞内cAMP含量，当AC-cAMP信号通路中PDE4的活性受到抑制后，NR8383-TGR5细胞内cAMP含量能进一步增加，对TCDCA提高NR8383-TGR5细胞内cAMP含量无影响，因而提示TCDCA参与了TGR5受体介导的AC-cAMP信号通路中。