我国鸡群禽戊型肝炎病毒感染的血清学和分子流行病学调查

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禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是鸡大肝大脾(Big liver and spleendisease,BLS)病或肝炎脾大(Hepatitis-Splenomegaly,HS)综合症的主要病原,主要引起30-72周龄的蛋鸡和肉种鸡的死淘率升高和产蛋率下降(20-40%),发病鸡通常腹部充血,卵巢退化,肝脏脂肪或淀粉样变性,偶有肝脾肿大。该病曾给澳大利亚的养禽业造成了严重的经济损失,而我国也时有该病爆发的报道。禽HEV与人、猪HEV同属于肝炎病毒属,为无囊膜,单股正链RNA病毒,其基因组全长约为6.6kb,比哺乳动物HEV基因组全长少600bp左右,包含5’帽子和3’PolyA结构,含有3个开放阅读框(Open reading frame,ORF),分别为ORF1、ORF2和ORF3。其中ORF2基因编码衣壳蛋白是病毒的主要结构蛋白,并且包含病毒主要的抗原表位。本研究以兽医免疫生物学实验室分离的禽HEV中国分离株(CaHEV)为材料基础,利用分子生物学技术构建和表达CaHEV ORF2蛋白C端268个氨基酸,纯化后获得蛋白ORF2-268,将该蛋白作为包被抗原,摸索优化ELISA条件,建立禽HEV血清学诊断的间接ELISA方法。利用该ELISA方法,调查了中国12个省市自治区38个种鸡场的禽HEV血清学流行情况。结果发现38个种鸡场34个有过禽HEV的感染,不同鸡场的血清阳性率差异显著。其中有上海某种鸡鸡场的阳性率达到了86.2%,而在检测的所有5755份血清中,2528份阳性,阳性率达到了43.9%,说明禽HEV的感染在我国种鸡场已经非常严重,而且该病毒的感染已在全国范围内广泛流行。而不同品种鸡的血清学调查发现,国外品种鸡的阳性率明显高于国内品种,不同周龄的鸡只中30-39周龄的鸡只阳性率最高。此外,从我国6个地区部分鸡场收集发病鸡的胆汁和粪便样品共166份,提取总RNA。然后参考国外研究学者设计的禽HEV检测引物,对提取的RNA进行巢式RT-PCR检测。结果90份胆汁样品11份为阳性,76份粪便样品8份为阳性。阳性样品克隆测序,获得的序列与国外参考序列的同源性比较发现,其与欧洲部分国家的分离株同源性较高,属于禽HEV基因3型。
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