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羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)又称接触传染性脓疱皮炎病毒(Contagious pustular dermatitis virus,CPDV),主要引起绵羊和山羊的急性脓疱性皮肤病,且可感染人。为了研究陕北白绒山羊羊群中流行ORFV的生物学特性及流行特征,在某白绒山羊场采集具有典型羊口疮症状的病羊结痂病料,用MDBK进行病毒分离培养。同时用特异性引物对ORFV的B2L和F1L基因全长进行扩增,并从核苷酸和氨基酸水平上对其同源性进行分析,同时对分离的毒株进行遗传进化分析。基于杆状病毒表达系统,对ORFV的B2L、F1L和B2L-F1L分别进行真核表达,并通过SDS-PAGE、质谱以及Western blot等方法进行鉴定,利用纯化的重组蛋白建立ORFV的间接ELISA检测方法,并检测重组蛋白的免疫保护性,为羊口疮病的防控提供了新思路。1.将疑似病料处理液在MDBK细胞上盲传至5代后,可见产生明显的CPE,经PCR鉴定成功分离到了ORFV,将其命名为ORFV-Yulin。2.扩增的B2L基因和F1L基因大小分别为1 137 bp和1 029 bp。基于B2L基因核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,ORFV-Yulin与Hub13株亲缘关系最近:基于F1L基因核苷酸序列绘制的进化树分析结果显示,ORFV-Yulin与福建株(FJ-MH2015)、山西株(Shanxi)以及福建株(XP)属于同一个分支。3.成功构建了昆虫杆状病毒表达载体pBac-B2L和pBac-cF1L,经SDS-PAGE、质谱以及western blot鉴定,B2L和F1L均在sf9细胞中获得了成功表达,但两种蛋白的可溶性比例均不高。4.截掉F1L基因的信号肽序列,并利用碱基linker连接,通过重叠PCR的方法成功获得ORFVB2L-linker-cF1L重组基因(GB2LcF1L)。SDS-PAGE、质谱鉴定以及western blot检测结果显示重组蛋白rB2LcF1L在sf9细胞中获得高效表达,且约40%重组蛋白能分泌到细胞培养基中。5.以重组蛋白rB2LcF1L作为包被抗原成功建立了特异性、敏感性和重复性均较好的间接ELISA检测方法。6.将重组蛋白rB2LcF1L两次免疫小鼠后,结果显示中和抗体可达1:32以上,对免疫后小鼠进行攻毒,结果显示免疫保护率可达70%。