论文部分内容阅读
第一部分 成体SD大鼠NSCs的分离、培养、传代、分化与鉴定 【目的】成体SD大鼠海马细胞分离、纯化、体外培养，进行神经干细胞(neural stem cells, NSCs)的鉴定及增殖、分化能力的检测。 【方法】采用机械方法分离、消化SD大鼠海马细胞，用含有EGF和bFGF的培养液进行体外培养。MTT法绘制细胞生长曲线；Brdu检测细胞增殖状态；免疫荧光检测Nestin表达和诱导分化形成神经元的标记NSE及星型胶质细胞的标记GFAP的荧光表达。 【结果】原代细胞和传代细胞培养均能形成较大及较多的克隆球；传代细胞于四代左右时有大量增殖；单克隆培养传代至8代以后增殖状态明显退化；原代、传代以及单克隆培养细胞均表达Nestin阳性；诱导分化后细胞能够分化为表达NSE和GFAP的阳性细胞即神经元和星型胶质细胞。 【结论】体外培养成体SD大鼠海马细胞具有自我增殖能力及多分化潜能。体外培养纯化法可以成功培养成体SD大鼠神经干细胞。