人有机阴离子转运体（hOATs）在全身广泛表达,通过介导各种小分子化合物在细胞膜上的交换维持机体的正常生理功能。hOATs对于外源性物质在体内的处置过程起着重要的作用,许多临床上常用的治疗药物被报道是hOATs的底物或抑制剂。对于一些治疗窗较窄的药物,hOATs转运活性的改变可能会导致其体内的药代动力学变化,引起严重的毒副作用,威胁患者生命安全。中药在我国传承千年,源远流长。目前,中药与西药合用治疗十分普遍,但中药成分复杂,许多活性成分能够通过影响药物转运体从而与西药产生相互作用,可能会改变疗效及产生毒副作用。因此,系统研究中药活性成分与药物转运体的相互关系,并以此优化中西药配伍,不仅能够更好地理解活性成分的体内处置过程,有利于活性成分成药性研究,更有助于提升中药临床用药的安全有效性。呋喃香豆素在自然界中广泛存在,我国许多传统中药如白芷、独活等均含有呋喃香豆素类化合物,其具有抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。已有研究报道白芷中的呋喃香豆素欧前胡素、异欧前胡素和佛手柑内酯在肝脏和肾脏中快速分布,其肝脏摄取可能存在主动转运机制,但目前未发现哪种转运体负责转运这三种呋喃香豆素,且其是否对转运体有抑制作用也未知。因此本文选择了三种呋喃香豆素欧前胡素、异欧前胡素和佛手柑内酯作为研究对象。我们利用人源有机阴离子转运体转基因细胞模型评价了上述三种呋喃香豆素与肾脏、肝脏高表达有机阴离子转运体hOAT1、hOAT2和hOAT3的体外相互作用关系,包括这三种呋喃香豆素是否是hOAT1-3的底物及抑制剂。通过本课题的研究,对三种呋喃香豆素体内处置过程有更为深入的了解,也为含这三种呋喃香豆素的中药应用提供必要的数据支持和科学依据。本课题的研究内容和主要结果如下:1.建立并验证了三种呋喃香豆素的LC-MS/MS分析方法为研究三种呋喃香豆素与hOATs的相互作用,分别建立了欧前胡素、异欧前胡素和佛手柑内酯在细胞裂解液中的LC-MS/MS分析方法,并进行方法学验证。方法学验证结果表明,建立的分析方法的专属性、标准曲线、精密度、准确度、基质效应、提取回收率和样品稳定性均满足生物样品定量分析方法验证指导原则中要求,证明了所建立的LC-MS/MS能够对后续实验提供稳定、可靠的检测。2.三种呋喃香豆素与hOAT1、hOAT2和hOAT3的体外相互作用采用实验室已构建的人源有机阴离子转基因细胞模型考察了三种呋喃香豆素与hOATs的相互作用。结果显示三种呋喃香豆素均不为hOAT1、hOAT2和hOAT3的底物,其摄取在转运体过表达细胞和对应mock细胞中无差异,时间依赖实验和浓度依赖实验进一步确认了这三种呋喃香豆素在hOAT1-3过表达细胞模型中主要以被动扩散方式进入细胞。虽然不为底物,但是三种呋喃香豆素对于hOAT1、hOAT2和hOAT3存在着不同程度的抑制作用。欧前胡素是hOAT1、hOAT2和hOAT3的抑制剂,对hOAT2活性抑制效果最强,IC₅₀值为29.93±3.34μM。异欧前胡素是hOAT1-3的抑制剂,对hOAT3活性的抑制效果最强,IC₅₀值为43.51±9.96μM。相较于欧前胡素和异欧前胡素,佛手柑内酯对hOAT1-3的抑制效果最弱,其对于hOAT3无活性抑制效果,而对于hOAT1和hOAT2,佛手柑内酯在最高浓度下仍无法抑制活性至50%以下。体外评价结果提示着三种呋喃香豆素单独存在或组合存在时极有可能影响hOAT1-3体内正常功能。应避免这三种呋喃香豆素或含有较高浓度这三种呋喃香豆素的食物或中药与治疗窗较窄的hOAT1、hOAT2、hOAT3底物药物合用。