背景：心血管疾病已成为全球健康所关注的焦点,其中最为常见的是心肌梗死,目前对该病的治疗方法很不确定,通过基因导入CyclinA2的表达方法可使心肌细胞周期分化激活,并可增加临界区的肌丝密度,提高心肌功能。CyclinA2基因导入法可望成为一种高效的治疗心肌梗死的方法。目的：制作心肌细胞缺氧模型,探讨心肌细胞转染CyclinA2后对心肌细胞缺氧的作用。方法：1.细胞培养(1)取1-3d SD大鼠12只,取心室肌组织分别消化、离心、标记后,分别在培养箱中培养。(2)将培养的心肌细胞4%多聚甲醛固定后分别行常规细胞免疫组化染色鉴定。2.腺病毒转染(1)待细胞培养到36h,将cyclinA2腺病毒和空载体病毒转染至细胞内继续培养12h。(2)将转染病毒后的细胞培养12h后进行固定,常规免疫荧光检测细胞状态。3.细胞缺氧(1)将培养第三天的心肌细胞进行分时间段缺氧培养。(2)将转染腺病毒和转染空载体后的细胞进行分时间段缺氧培养。4. western blotting检测分别将培养三天的心肌细胞、缺氧的心肌细胞、转染腺病毒后的心肌细胞、转染腺病毒后并缺氧的心肌细胞提取蛋白-20℃保存。提取CyclinA2蛋白分组进行western blotting检测。结果1.常规免疫组化细胞染色显示,新生大鼠心肌细胞内cyclinA2存在于细胞质并随着培养时间的增加而减少。2.新生大鼠心肌细胞差速贴壁60mins和滴加BrdU48h后倒置显微镜下观察,可见有细胞搏动,频率不等,大部分呈小的梭形,4d后细胞主要有三种形态：梭形、椭圆形、不规则形,搏动频率约为(80±7)/min。3.免疫细胞化学结果显示,倒置显微镜下观察,新生大鼠心肌细胞缺氧6hcyclinA2表达最高,12h表达最低甚至不再表达。4.腺病毒转染后,心肌细胞中cyclinA2表达较转染前明显升高。5.腺病毒转染并缺氧后cyclinA2表达变化,实验组一：腺病毒转染,cyclinA2表达升高。实验组二：空载体转染,cyclinA2无明显变化。实验组三：腺病毒转染缺氧,cyclinA2表达相对升高。实验组四：空载体转染缺氧,cyclinA2表达在持续时间后慢慢降低。对照组：cyclinA2表达无明显变化。结论1. cyclinA2在心肌细胞培养过程中随着时间的增加而减少。2. cyclinA2在缺氧前期(6h)表达量呈升高趋势,然后呈下降趋势,至12h降到最低甚至消失。3.腺病毒转染后,心肌细胞中cyclinA2表达明显增高,且在缺氧条件下表达也增高。