目的:利用大脑中动脉缺血预处理模型,观察局灶性脑缺血预处理对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor -1α,HIF-1α)在大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)中的表达影响,旨在探讨其在脑缺血耐受产生中的作用,对脑缺血耐受产生的机制做初步研究。 方法: 将 112 只 Wistar 大鼠随机分成假手术对照组、预缺血组(PC)、缺血组(MCAO)和预缺血+缺血组(PC+MCAO)各 28 只。采用插线法制作大脑中动脉缺血预处理动物模型; 取出大鼠脑组织,运用RT-PCR 检测 HIF-1α的 mRNA;Western 检测 HIF-1α的蛋白表达;HE染色光镜和透射镜进行病理观察;干湿重法计算脑组织含水量,了解脑水肿的程度;TTC 染色计算脑梗死面积及梗死体积百分比,说明脑梗塞的程度。 结果:RT-PCR 检测结果:假手术对照组与 PC 组均检测到少量HIF-1αmRNA, D/D0值分别为 0.208±0.1270 与0.2165±0.127, 两组比较无统计学意义;PC+MCAO 组 D/D0值为 0.75±0.023,MCAO 组 D/D0值为 0.30±0.027,与对照组相比表达都明显增高; PC+MCAO 组比MCAO 组增高,p<0.05,有显著差异。Western 印迹法检测,假手术对重庆医科大学硕士研究生学位论文3照组与 PC 组未检测到 HIF-1α蛋白;MCAO 组蛋白区带灰度值为 0.26±0.032;PC+MCAO 组蛋白区带灰度值为 0.50±0.012,p<0.05,两者具有显著差异。假手术对照组与 PC 组光镜和超微结构未观察到明显改变;与 MCAO 组相比,PC+MCAO 组在脑梗死面积百分比明显减少,脑水肿程度亦明显降低,光镜和超微结构病理变化减轻。结论:缺血预处理后再次遭受严重缺血 HIF-1α表达上调, 同时缺血侧脑组织含水量降低,梗塞面积减少,组织病理变化减轻, 产生了脑缺血耐受,HIF-1α的表达上调是脑缺血耐受形成的分子机制之一。脑缺血耐受的神经保护作用与 HIF-1α表达密切相关。 关键词:脑缺血耐受,缺血预处理,HIF-1α重庆医科大学硕士研究生学位论文4第 二 部 分 VEGF 在脑缺血耐受中的作用探讨 摘 要目的:采用大脑中动脉缺血预处理模型,观察局灶性脑缺血预处理对 HIF-1α的靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)在 MCAO 中的表达影响,旨在探讨 VEGF 在脑缺血耐受产生中的作用机制。 方法: 将 40 只 Wistar 大鼠随机分成假手术对照组、预缺血组(PC)、缺血组(MCAO)和预缺血+缺血组(PC+MCAO)4 组,每组各 10 只。用插线法制作大脑中动脉缺血预处理动物模型,取出各组脑组织,RT-PCR 检测 VEGF 的 mRNA 的表达,Western 检测 VEGF 的蛋白质表达情况;光镜、超微结构病理观察、脑组织含水量和脑梗死面积及梗死体积百分比的测定同第一部分。 结果R:T-PCR检测结果P:C组VEGF基因的D/D0值为 0.29±0.093,与对照组 0.28±0.021 比较略增高,两组比较无统计学意义;MCAO 组D/D0值为 0.59±0.022 , PC+MCAO 组 D/D0值为 0.74±0.031 ,两组与对照组比较,明显增高; PC+MCAO 组比 MCAO 组增高,p<0.05,有显著差异。Western 印迹法检测:假手术对照组与 PC 组蛋白区带灰度值分别为 0.21±0.032 和 0.22±0.010,两组比较无统计学意义;MCAO 组蛋白区带灰度为 0.27±0.012,PC+MCAO 组蛋白灰度值为 0.41±0.012,两组与对照组比较,明显增高;PC+MCAO 组比 MCAO 组增高,p<0.05,