肝素是糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)家族中的异质性的高负电荷的线性多糖,由己糖醛酸(HexA)和D-葡萄糖胺(G1cN)通过1-4糖苷键连接形成的重复二糖单元构成,主要存在于哺乳动物的肥大细胞。肝素自1935年首次进入临床应用,直到现在已有80多年的历史,一直被用作临床抗凝血药物,广泛用于血栓性疾病的预防和治疗。在抗凝血药物的发展历史中,虽然有抗凝血类的小分子药物应用于市场,但是天然来源肝素类药物仍起着不可替代的作用。最初药用肝素从牛肺和猪肠粘膜中提取,直到上世纪90年代疯牛病爆发,导致牛来源肝素被全部召回,世界范围内的肝素市场由猪肠粘膜肝素占领。然而在2007～2008年发生了肝素钠污染事件,当时商家蒙骗当时药典的评估方法,将具有抗凝血活性的OSCS参入到肝素中,导致近100名病人死亡,因此,人们越来越关注肝素供应的稳定及安全。肝素市场面临的主要问题是单一的动物来源,其种群规模、产量水平和价格受到疾病爆发的影响,很容易遭受掺假、污染以及与来自其他反刍类动物肝素混合。有研究表明牛、绵羊等反刍类动物肝素在抗凝血活性、分子量和中和特性方面与猪肝素相似。由于监管规定,这些来源肝素目前还没有广泛应用于临床实践,因此,这种情况需要开发分析方法来有效地识别肝素的来源。对肝素中残留的核酸进行实时荧光定量PCR是目前用于分析肝素中有无其他反刍类动物肝素的有效方法。但是粗品肝素经过一系列纯化后产生的精品肝素很大一部分检测不到核酸。因此,从不同动物来源肝素本身寻找糖链结构差异,从而进行肝素的溯源非常有必要。本论文研究猪和绵羊来源肝素结构差异,并建立区分绵羊肝素和猪肝素的可靠方法。主要通过阴离子交换色谱(Anionexchangechromatography,SAX)分析肝素寡糖并结合主成分分析(Principal component analysis,PCA)来实现肝素来源的评判。首先通过肝素提取工艺直接从猪、绵羊小肠进行肝素提取纯化,依照中国药典对样品酸碱度、DS含量、吸光度等进行检测,均符合药典规定。然后利用肝素酶的特异性对不同来源肝素进行完全降解及部分降解,亲水相互作用液相色谱-质谱联用技术(Hydrophilic interaction liquid chromatography-mass spectrometry,HILIC-MS)定量分析肝素完全酶解样品,发现一种含有四个硫酸修饰的三糖含量在绵羊肝素中远大于猪来源肝素,三糖产生的具体原因需进一步研究,有待成为区分猪和绵羊来源肝素的有力证据。对肝素酶I特异性降解产生的肝素寡糖六糖进一步用SAX分离分析,证明了两种来源肝素寡糖各结构含量具有显著差异。结合PCA对SAX图谱进行分析,可以鉴别出大于5%的绵羊肝素混合样品。本研究为肝素动物来源提供了新的评价及鉴定方法,相比于荧光定量PCR方法,该方法可以实现对各种纯化处理过的精品肝素进行来源评价,促进了肝素来源的全面监管,保障了药品安全。