【摘 要】
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目的:利用高滴度人血清HBV接种新生树鼩,构建HBV慢性感染树鼩模型,并且观察感染后树鼩体内IL-17、IL-23与IL-8的表达变化,初步探讨IL-17、IL-23与IL-8在HBV慢性感染发病机制中的作用。方法:取新生树鼩25只,随机分为2组,分别为实验组18只和对照组7只。实验组树鼩于第1,3日龄经双侧大腿皮下接种人HBV（10~7IU/ml）血清,对照组用生理盐水代替,每次接种量为300μ
【基金项目】
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项目名称:应用树鼩模型动态观察乙肝病毒感染过程中宿主肝内的免疫反应并对模型进行再优化，项目合同编号:NO.81460418，项目来源:国家自然科学基金，项目起止时间:2015.01~2018.12
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目的:利用高滴度人血清HBV接种新生树鼩,构建HBV慢性感染树鼩模型,并且观察感染后树鼩体内IL-17、IL-23与IL-8的表达变化,初步探讨IL-17、IL-23与IL-8在HBV慢性感染发病机制中的作用。方法:取新生树鼩25只,随机分为2组,分别为实验组18只和对照组7只。实验组树鼩于第1,3日龄经双侧大腿皮下接种人HBV（10~7IU/ml）血清,对照组用生理盐水代替,每次接种量为300μL,共600μL。接种后第8、12、16、20、24周经股静脉采血1次,接种后第12、24周剖腹取肝活检1次。ELISA法检测血清中HBs Ag的表达,荧光定量PCR（探针法）检测血清与肝组织中的HBV DNA含量,免疫组化法观察肝组织中HBs Ag表达情况,HE染色法观察肝组织中病理情况。实验组的树鼩根据检测结果被分为慢性感染组与疑似慢性感染组。对照组7只。实时荧光定量PCR法（q PCR）检测三组树鼩肝组织中IL-17、IL-23与IL-8m RNA的表达水平,ELISA法检测三组树鼩血清中IL-17、IL-23与IL-8蛋白表达量,以及免疫组化法观察三组树鼩肝组织中IL-17、IL-23与IL-8蛋白的表达情况。结果:将血清HBs Ag或HBV-DNA持续阳性时间达24周定义为慢性感染组,将血清HBs Ag或HBV-DNA间断出现2次或2次以上阳性定义为疑似慢性感染组。在第8～24周观察周期内,25只树鼩血清HBs Ag和HBV-DNA检测结果有8只树鼩将其定义为慢性感染组;有10只树鼩定义为疑似慢性感染组。对照组血清中HBs Ag和HBV-DNA检测结果均为阴性。慢性感染树鼩组肝组织中有2只在12周与24周HBs Ag有阳性表达,而疑似慢性感染组与对照组中无HBs Ag阳性表达。HBs Ag阳性表达为棕黄色,主要在肝细胞浆中表达。疑似慢性感染组以及慢性感染组相比于对照组肝组织病理学形态学变化较轻,并且有少量单核细胞、淋巴细胞浸润,肝细胞胞浆疏松化。在第12周与第24周,慢性感染组树鼩肝组织IL-17、IL-23、IL-8 m RNA的表达水平明显高于对照组（P0.05）。慢性感染组血清IL-17、IL-23和IL-8蛋白表达量在五个检测点（8周、12周、16周、20周、24周）明显高于对照组（P<0.05）。疑似慢性感染组与对照组相比,血清中IL-17、IL-23和IL-8水平稍增高,仅IL-17在第16周时有显著差异（P<0.05）。树鼩肝组织中IL-17、IL-23和IL-8蛋白主要在细胞质中表达,少数在细胞膜上表达,阳性染色显示多为棕黄色或者棕褐色。慢性感染组中树鼩肝组织IL-17、IL-23和IL-8蛋白的表达均高于对照组、疑似慢性感染组中的表达,且两两比较有显著性差异（P<0.05）。结论:（1）高滴度（10~7IU/ml）的人血清HBV可以成功构建HBV慢性感染树鼩模型。（2）HBV慢性感染组树鼩血清与肝组织中的IL-17、IL-23与IL-8表达均高于对照组树鼩,提示IL-17、IL-23与IL-8可能与HBV感染慢性化以及乙型肝炎的发展有关。2.IL-17、IL-23、IL-8在临床HBV相关性肝疾病中的表达及意义目的:收集临床患有HBV相关性肝疾病患者的血清,进一步检测患者体内IL-17、IL-23与IL-8的表达变化,初步探讨IL-17、IL-23与IL-8在HBV相关性肝疾病发展进程中的作用。方法:收集2019年5月至2019年7月期间,于广西医科大学附属第一医院感染科门诊就诊患者共240例,其中乙肝无症状携带者（As C）48例,慢性乙型肝炎患者（CHB）47例,乙肝相关性肝硬化患者（HBV-LC）51例,乙肝相关性肝癌患者（HBV-HCC）62例,同期健康体检者作为健康对照组（HC）32例。用荧光定量PCR（探针法）检测所有血清中的HBV DNA含量,用ELISA法检测所有血清中的IL-17、IL-23与IL-8蛋白表达量。结果:所选择的HBV肝相关疾病病人HBV-DNA表达量均值为10~5～10~6IU/ml,健康对照组的HBV-DNA表达量均低于临床阳性标准（即<500IU/ml）。As C组、CHB组、HBV-LC组及HBV-HCC组中血清IL-17、IL-23、IL-8的蛋白含量都高于HC组（对照组）,且IL-17、IL-23、IL-8的蛋白含量随着HBV相关肝疾病严重程度的升高而升高。结论:从HBV感染机体后可能发展为乙肝携带者、慢性乙型肝炎、肝纤维化以及肝癌这一过程中,随着病情程度的加重,IL-17、IL-23与IL-8的表达量越高,提示IL-17、IL-23与IL-8可能参与HBV相关性肝疾病的进展。
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