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背景:乳腺癌是全世界发病率最高的恶性肿瘤,晚期乳腺癌的中位生存时间在2-3年左右。HER2阴性的乳腺癌缺乏特异性靶向治疗,对于HER2阴性的患者,寻找能提高治疗效果的靶向治疗药物,是目前研究领域的热点和难点。肿瘤血管生成在肿瘤的生长和侵袭中起着重要的作用,安罗替尼是一种新型的抗血管生成小分子酪氨酸酶抑制剂,其靶点为血管内皮生长因子受体（Vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR）-1（Flt1）,VEGFR-2,VEGFR-3（Flt4）的,血小板衍生的生长因子受体（Platelet-derived growth factor receptors,PDGFRs）和c-KIT等。临床前研究中安罗替尼可抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞增殖,临床研究显示在晚期非小细胞、软组织肉瘤等肿瘤疗效显著。本研究旨在探究安罗替尼治疗HER2阴性晚期乳腺癌的疗效、安全性以及生物标志物。方法:入组标准为转移后至少接受过一线化疗、激素受体阳性者接受过所有可及的内分泌治疗及一线化疗的HER2阴性晚期乳腺癌患者,且在新辅助、辅助或转移后治疗中接受过含蒽环类或紫杉类药物的方案化疗,年龄在18-75岁之间。入组期间服用安罗替尼每日12mg,连续14天,21天为1周期。患者在基线以及治疗中每2周期接受CT或MRI进行疗效评估,直到疾病进展或出现不可接受的毒性。主要研究终点是客观缓解率（Objective response rate,ORR）,次要研究终点包括疾病控制率（Disease control rate,DCR）,无进展生存期（Progression free survival,PFS）,总生存期（Overall survival,OS）,安全性和生物标志物。同时,每2个治疗周期收集10 mL静脉血进行循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA,ctDNA）检测。采用杂交捕获高通量测序检测突变（Mutant）、拷贝数变异（Copy number variants,CNV）、单核苷酸变异（Single Nucleotide Variants,SNV）、结构变异（Structure variation,SV）,探索 ctDNA 变异与疗效及不良反应的关系,筛选潜在生物标志物。结果:本研究共纳入26名符合入组条件的患者,中位年龄为56（30-75）岁。中位随访时间为10.5个月。4名患者达到部分缓解,ORR为15.4%,17名患者达到疾病稳定,DCR为80.8%,中位PFS为5.22月（95%置信区间2.86-6.24）。随访期间2名患者死亡,中位OS未达到,14名（53.8%）患者存活超过10个月。最常见的与治疗相关的不良事件是高血压（57.7%）,促甲状腺激素升高（34.6%）和手足综合征（23.1%）。出现手足综合征的患者的中位PFS比未出现者延长（中位PFS为5.22vs.2.86月,P=0.62）。17例患者留取外周静脉血进行ctDNA检测,其中17患者留取基线血标本,11例患者留取基线和至少1个疗效评估点的外周血标本。基因改变的类型主要是拷贝数变异（Copy number variants,CNV）,点突变和结构变异（structure variation,SV）。最常见的突变基因是 TP53（11/17,64.7%）,PIK3CA（7/17,41.2%）,BRCA1（3/16,17.6%）和 ESR1（3/16,17.6%）。检测TP53突变（P=0.057）或者PIK3CA变异等位基因频率（Variant allele frequency,VAF）大于1%的患者（P<0.01）中位PFS明显缩短。81.7%患者所测ctDNA VAF的变化趋势与影像学检测的肿瘤负荷变化一致。结论:（1）安罗替尼在二线及以后的HER2阴性转移性乳腺癌中具有潜在的疗效和可耐受的不良反应;（2）治疗期间出现手足综合征可能是疗效预测标志。（3）出现 TP53 突变 PIK3CA 变异等位基因频率（Variant allele frequency,VAF）大于1%可能是安罗替尼疗效不佳的预测标志;（4）ctDNA变异等位基因部分的动态变化可能预示肿瘤负荷。背景:三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是指雌激素受体、孕激素受体及人表皮生长因子受体-2表达均为阴性的乳腺癌,约占总体20%左右。TNBC发病年龄低,侵袭性强,易复发转移,缺少有效治疗靶点。安罗替尼是我国自主研发的1.1类抗血管生成小分子酪氨酸激酶抑制剂,在晚期TNBC乳腺癌中显示出潜在疗效。但是仍存在部分患者对安罗替尼敏感性不高的情况。因而探究影响安罗替尼敏感性的因素是亟待解决的关键问题。方法:（1）本实验选取MDA-MB-231及HCC38作为实验对象,通过培养上述细胞并给予安罗替尼处理,通过CCK-8实验观察细胞活力;（2）给予MDA-MA-231细胞安罗替尼处理,进行转录组测序探索安罗替尼作用靶点;（3）给予MDA-MA-231及HCC38安罗替尼浓度梯度及时间梯度处理,用Western Blot检测Smurf2及相关自噬蛋白的表达;（4）通过构建Flag-Smurf2质粒,并在MDA-MA-231中过表达Flag-Smurf2,同时给予安罗替尼处理,用Western Blot检测Smurf2及相关自噬蛋白的表达;（5）通过免疫共沉淀检测Smurf2与ATG7的相互作用;（6）通过梯度过表达Smurf2并用Western Blot检测ATG7的表达;（7）构建MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,给予安罗替尼处理,观察肿瘤体积变化,用Western Blot检测肿瘤组织Smurf2、ATG7及相关自噬蛋白的表达,用免疫组化检测肿瘤组织Smurf2的表达。结果:（1）安罗替尼可以抑制TNBC细胞活力;（2）安罗替尼作用靶点包括PI3K-AKT通路、MAPK通路、Rap1信号转导通路等,与自噬等功能有关;安罗替尼抑制E3泛素连接酶Smurf2的转录;（3）随着安罗替尼作用浓度的增加,细胞内Smurf2的表达逐渐降低,自噬水平逐渐增强;（4）过表达Flag-Smurf2可以抑制安罗替尼诱导的自噬;（5）Smurf2与ATG7可以互相作用;（6）梯度过表达Flag-Smurf2可以降低ATG7的表达;（7）安罗替尼在体内可以诱导自噬,抑制Smurf2的表达,增加ATG7的表达。结论:安罗替尼通过下调Smurf2抑制泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白降解,引起ATG7积累进而诱导TNBC细胞发生自噬,导致药物敏感性下降。