乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其致死原因为远处转移。在目前的临床工作中，预防与治疗乳腺癌的远处转移是尚未解决的难题。尤其是乳腺癌的骨转移，能引起局部较剧烈的疼痛、病理性骨折、高血钙症及神经精神综合征等严重的临床症状，而目前无论是化疗、放疗、同位素治疗均无理想的疗效。自90年代起，人们越来越认识到肿瘤增生、转移离不开肿瘤新生血管的形成。而抗肿瘤血管形成治疗是针对肿瘤血管内皮细胞或肿瘤血管形成因子的治疗，能使肿瘤周围的血管减少甚至消失。这样就消除了肿瘤增生所需营养的来源，使肿瘤细胞增生减缓以至凋亡；同时也消除了肿瘤转移所需的通道。而抗血管形成治疗目前尚处于实验研究价段。基于目前的研究现状，我们设计并进行了如下的实验与临床研究。 一、对乳腺癌手术患者全麻后先于髂前上嵴及胸骨穿刺吸取骨髓5ml，巢式RT-PCR检测骨髓内CK19 mRNA，来判断乳腺癌骨髓微转移灶；CD34抗体标记乳腺癌原发灶内肿瘤微血管，于显微镜下计数肿瘤MVD；RT-PCR检测原发灶内VEGF、MMP-2 mRNA，Western blot法检测其蛋白表达量；tunel法检测原发灶的凋亡，免疫组化检测ER、PR、cer-B-2；流式细胞仪检测Bcl-2、Fas、SPF；同时记录肿瘤的大小、腋淋巴结转移状况。结果：骨髓微转移灶的发生率为54.86％，与腋淋巴结转移状况无关；肿瘤MVD与肿瘤腋淋巴转移状况、骨髓微转移灶有关，与 乳腺癌骨转移相关囚素的实验与临床仙穴 摘要 肿瘤大小无关；与乳腺纤维瘤相比，乳腺癌VEGF、MMP上转录水平蛋 白表达水平均显著升高：乳腺癌原发灶的凋亡与BC12的下调、FCS的上 升有关；同时肿瘤的高凋亡率常伴有高增生活性；经Cox model多因素0 回归分析发现肿瘤MVD是唯一对骨髓微转移灶有预示价值的指标。因此 我们认为，RTPCR是检测乳腺癌骨髓微转移灶可靠的方法，而骨髓微转 移灶的形成与原发灶的MVD相关并伴有明显升高的肿瘤血管形成刺激 因子，因此抗血管形成治疗应该是乳腺癌骨转移有针对性的治疗。 二、鉴于目前尚无一种成熟的抗肿瘤血管形成的药物，因此我们选 择二种有特色的药物进行体外抗血管形成治疗的研究。在体外我们采用 内皮细胞增殖模型、内皮细胞迁移模型、内皮细胞凋亡模型及CAM血管 形成模型，观测了PAA、HCPT抑制血管形成的效果；流式细胞仪检测 了内皮细胞在药物作用后k上表达的变化。我们发现，这二种抗血管形 成药物均能明显抑制内皮细胞增生、迁移、CAM血管形成；通过下调内 皮细胞BCI上的表达来诱导内皮细胞的凋亡。因此我们认为PAA、HCPT！是较有效的抗血管形成药物，其作用点在于血管内皮细胞，作用机制为 下调内皮细胞BC12来诱导内皮细胞凋亡。 三。为研究PA A、＊＊PT体内抗肿瘤血管形成的作用，我们采用 MDA．MB《3 细胞经裸鼠左乙室注射建立乳腺癌骨转移模型；采用 MDA－MB斗35细胞经裸鼠原位接种建成乳腺癌肺转移模型；对骨转移模 型，我们待骨转移形成后，开始用PAA、HCPT进行抑制骨转移的治疗 性研究；对肺转移模型，我们在肺转移尚未形成时开始用PAA，观察PAA 预防肺转移形成的效果。结果：PAA、HCPT均能显著地抑制乳腺癌的骨 转移，骨转移灶的 MVD显著下降，RTPCR、Western blot检测发现治疗 组 VEGF、M硼二明显下降，Armexin V与 PI双标记经流式细胞仪检测 11 午 乳腺癌骨转移相关因素的实验与临床研究 摘要 发现骨转移灶出现明显的早期凋亡、骨转移灶肿瘤细胞BC12明显下调； PAA早期应用能明显减少实验鼠肺转移灶数量，其原发灶MVD也同时 下降。我们认为，PAA、HCPT是有效的治疗乳腺癌骨转移的药物，早期． 应用能预防乳腺癌肺转移，其作用机制在于抑制了肿瘤的MVD。因此抗 肿瘤血管形成是治疗及预防乳腺癌远处转移的一种有效方法。 四、为了能动态观察乳腺癌骨转移及肺转移的形成过程及其伴随的 肿瘤血管形成过程，能在单细胞水平观察抗血管形成药物的疗效及机制， 我们通过转基因的方法将 GFP基因转入乳腺癌细胞 MDA－m《3，克隆 出能稳定传代、荧光较强的转基因细胞并将该细胞接种于裸鼠体内，在 荧光显微镜下进行了观测；并通过流式细胞仪检测转基因前后肿瘤细胞 的增生活性及凋亡相关蛋白的表达。结果显示，GFP转入肿瘤细胞后不 影晌其增生活性及相关凋亡蛋白的表达；在荧光?