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背景及目的高迁移率族蛋白B1(High-mobility group box 1,HMGB1)是广泛表达于真核细胞内高度保守的一种非组氨酸核蛋白,参与基因的表达和核小体的定位。HMGB1参与了CNS疾病的发生发展,在脑卒中和脊髓损伤早期可作为炎症因子加重神经炎症反应,后期则可促进神经血管的再生有利于神经功能的恢复。在胚胎发育时期,HMGB1参与神经元突触的生长及细胞的迁移。CNS损伤后,激活的星形胶质细胞也可分泌HMGB1,但其对星形胶质细胞迁移能力的影响还不清楚。前期的研究表明磁刺激能激活并调控星形胶质细胞的迁移能力。本实验将进一步研究MS诱导下HMGB1对星形胶质细胞迁移的影响,并探讨其作用机制。资料与方法1.星形胶质细胞的提取、培养及鉴定:提取出生后为2-3天SD(Sprague-Dawley)大鼠大脑皮质组织,分离培养星形胶质细胞,并观察其生长及形态,并用细胞免疫荧光技术观察GFAP蛋白的表达,鉴定星形胶质细胞的纯度。2.实验分组:根据不同频率的磁刺激将实验分为3组:(1)对照组;(2)低频磁刺激组(1HZ);(3)高频磁刺激组(10HZ)。观察细胞迁移能力,并运用Western Blot观察ERK1/2磷酸化及HMGB1表达情况。3.干扰HMGB1表达后细胞迁移实验分组:(1)控制组(磁刺激);(2)Si-RNA组(磁刺激+HMGB1 Si-RNA)。观察细胞迁移能力,并运用Western Blot检测干扰效果。4.U0126阻滞后细胞迁移实验分组:(1)控制组(磁刺激);(2)实验组(磁刺激+U0126)。观察细胞迁移能力,并运用Western Blot观察ERK1/2磷酸化及HMGB1表达情况。结果1.取培养的第3代大鼠星形胶质细胞,用GFAP荧光染色鉴定,星形胶质细胞纯度>95%。2.高频磁刺激促进星形胶质细胞的迁移能力,差异具有统计学意义(P<0.01)。且ERK1/2磷酸化及HMGB1的表达水平明显高于对照组和低频磁刺激组,差异具有统计学意义(P<0.01)。3.HMGB1 Si-RNA干扰后,HMGB1表达水平显著下降,且星形胶质细胞的迁移能力相应明显下降,与控制组相比差异有统计学意义(P<0.01)。4.U0126阻滞后,HMGB1表达水平显著降低,且星形胶质细胞的迁移能力相应明显下降,与控制组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论1.高频磁(10HZ)刺激促进星形胶质细胞的迁移,并可促进ERK1/2的磷酸化。2.高频磁(10HZ)刺激促进HMGB1的表达,并以自分泌的形式作用于星形胶质细胞,参与磁刺激诱导的星形胶质细胞迁移的过程。3.ERK1/2的磷酸化有利于HMGB1的表达,HMGB1为ERK1/2的下游信号。