论文部分内容阅读
背景:乳腺增生泛指乳腺纤维组织和上皮增生,进行性结缔组织的生长以及乳小叶和乳腺组织导管结构上的进行性病变。乳腺增生发病的主要原因是由于内分泌激素失调。乳腺炎是以乳腺组织炎性细胞浸润、内皮功能受损、大量促炎细胞因子分泌为特点,并常伴随组织氧化应激状态的一种乳腺疾病。本文首先采用了正交设计优化了玫瑰花总黄酮纯化工艺并通过急性和亚急性毒理实验明确了其口服安全性,再利用现代药理学研究方法,通过观察玫瑰花总黄酮对乳腺增生、乳腺炎大鼠的治疗作用,探讨其治疗机制,为其在临床上的应用及进一步的制剂开发提供了可靠的依据。方法:静态吸附与洗脱考察AB-8(弱极性)、HPD826(氢健)、HP D500(极性)和ADS-17(中极性+氢健)四种大孔树脂对玫瑰花总黄酮纯化的适用性,动态吸附洗脱条件用正交设计法进行优化。其口服安全性通过急性亚急性毒理试验评价。采用24hpf(hours post fe rtilization)健康TG(VEGFR2:GFP)系血管荧光转基因斑马鱼作为实验动物用以获得血管生成模型,同时加入不同剂量的玫瑰花总黄酮提取物与斑马鱼胚胎孵育24h,背部节间血管(intersegmental vessels,ISV)的生成情况在荧光显微镜下进行观察,通过计数评价玫瑰花总黄酮血管抑制程度。给予Wistar雌性大鼠肌肉注射雌激素(0.5mg?k g-1)25天,在随后的5天肌肉注射孕激素(5mg?kg-1)用以诱导大鼠乳腺增生(HMG)模型。同时给予大鼠玫瑰花总黄酮灌胃30天,届时对血液雌二醇和氧化应激水平进行测定,乳腺中AKT和JNK的表达通过免疫印迹分析进行评估,NFκB-p65,COX-2和VEGF的表达则通过免疫组化进行分析。大鼠乳腺炎模型使用脂多糖注射产后母鼠诱导,观察玫瑰花总黄酮(200和100mg?kg-1?d-1)给药干预对乳腺组织切片形态学变化、乳腺氧化应激和炎症应激水平的影响。结果:综合考虑,玫瑰花总黄酮最佳纯化工艺为按照0.5mg?ml-1的上样浓度,1ml?min-1的上样流速,4倍于柱体积的洗脱体积和2ml?min-1的洗脱流速纯化。低于剂量500mg?kg-1?d-1的口服给药是安全的。玫瑰花总黄酮20ug?ml-1和50ug?ml-1浓度下,斑马鱼血管生成受到了一定的抑制作用。检测结果显示相较于HMG组200mg?kg-1?d-1组大鼠体内雌激素和丙二醛水平显著降低(雌激素从32.53±1.08降低到25.71±0.96;MDA从6.96±0.90降低到4.47±0.40nmol?ml-1)。同时增加了总抗氧化水平(TAC,从4.17±0.73增加到7.71±0.67U?ml-1)和超氧化物歧化酶含量(SOD,从84.5±6.7增加到126.5±9.1U?ml-1)。另外,FRR抑制了乳腺中VEGF,COX-2和NFκB的表达以及降低了J NK和AKT的磷酸化。玫瑰花总黄酮给药能显著改善模型动物乳腺炎症细胞浸润的趋势,恢复乳腺组织抗氧酶的活力并抑制促炎细胞因子水平的上升。