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癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts, CAFs)是一类来源尚不清楚,位于肿瘤基质中的生物学行为活跃的成纤维细胞。α-SMA(α-smooth muscle actin, α-平滑肌肌动蛋白)通常用于鉴定其表型。CAFs与肿瘤发生发展间的联系一直是研究领域的热点,目前针对CAFs设计的靶向药物已进入临床试验阶段。透明质酸合酶2(Hyaluronan synthase2,HAS2)是广泛存在于脊椎动物中催化透明质酸HA合成的三种酶之一,其与胚胎发育、肿瘤、关节炎等疾病密切相关。本课题在分析HAS2在口腔癌组织标本中表达特点的基础上,探讨HAS2在CAFs影响口腔癌细胞生物学行为中的作用及相关机制,为进一步认识肿瘤微环境与口腔癌发生发展的关系、以及针对肿瘤微环境的生物学治疗提供依据。第一部分：透明质酸合酶-2在口腔鳞癌中的表达与意义目的：检测口腔癌临床标本中HAS2的表达分布特征,并分析其与临床病理参数及α-SMA阳性表达成纤维细胞之间的关系。方法：收集48例无放化疗病史的口腔癌患者的石蜡包埋肿瘤组织,以及配对的16例阴性切缘处取得的石蜡包埋正常黏膜组织,常规制作成5μm厚的病理切片。利用免疫组织化学的方法对标本进行染色。根据HAS2, α-SMA在肿瘤组织及正常组织中的表达情况进行评分,所得数据进行统计学分析。结果：HAS2在口腔癌组织肿瘤细胞中表达的阳性率为93.8%(45/48),在肿瘤基质中表达的阳性率为52.8%(25/48)；HAS2在正常口腔黏膜上皮细胞的表达阳性率为93.8%(15/16),在上皮下结缔组织中表达的阳性率为12.5%(2/16)。肿瘤基质中HAS2的表达情况与临床分期细=0.02)、淋巴结状态(p=0.02)、α-SMA阳性的CAFs (p<0.01)之间存在相关性。结论：HAS2在口腔癌发生发展、转移及肿瘤基质激活中可能发挥重要生物学作用。第二部分：透明质酸合酶-2在癌相关成纤维细胞影响口腔癌细胞生物学行为中的作用目的：检测CAFs对舌鳞癌细胞株Ca127生物学行为的影响,探讨HAS2在CAFs介导的Ca127侵袭行为中的作用及相关分子机制。方法：分别从同一舌癌患者手术切除标本的癌组织及癌旁组织获取CAFs和NFs。免疫细胞化学、Western blot鉴定细胞表型。通过MTT、间接共培养模型、侵袭试验比较NFs及CAFs对Ca127细胞增殖、上皮-间质转化、侵袭能力的影响。实时定量RT-PCR及Western blot检测HAS1,2,3在两型成纤维细胞中的表达。观察HAS抑制剂4-MU处理CAFs对Ca127细胞生物学特征的影响。利用siRNA抑制CAFs中的HAS2表达,并分析其对Ca127侵袭能力的影响。结果：a-SMA表达于CAFs, NFs中几乎无表达。相比NFs, CAFs能够促进Ca127细胞的增殖、侵袭,诱导Ca127细胞上皮-间质转化(EMT)。实时定量RT-PCR结果显示HAS2在CAFs中的表达是NFs的7倍(P<0.01)；4-MU在浓度0.4mM时抑常CAFs由HAS2, HAS3的表达而不影响其增殖,并能部分抵消其对肿瘤细胞增殖、侵袭、EMT的作用。NFs与肿瘤细胞间接共培养可诱导肿瘤细胞发生EMT及自身HAS2水平的增高。Ca127在HAS2干扰组的侵袭力显著低于无关序列组(P<0.01)。结论：CAFs促进Ca127细胞增殖、侵袭,诱导肿瘤细胞EMT,高表达HAS2可能是其作用机制之一,抑制肿瘤微环境中CAFs的HAS2功能可能是一条新的抗肿瘤侵袭转移方法。