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目的:利用蛋白质组学的方法研究6例宫颈癌组织新辅助化疗前后的蛋白表达图谱的改变,并对宫颈癌组织新辅助化疗前后差异表达的蛋白进行筛选、鉴定及验证。以期望得到与宫颈癌化疗敏感/耐药相关蛋白,从而在化疗前预测肿瘤对化疗药物的敏感性,使患者得到更加有效的个体化治疗。
方法:选取2007年~2008年在温州医学院附属第二医院行新辅助动脉化疗(有效)后手术的巨块型Ⅰ b~Ⅱa期宫颈鳞癌6例,收集其化疗前宫颈活检组织及手术新鲜标本保存于-80℃备用,所有标本均经病理学诊断为宫颈鳞癌。取患者化疗前后标本提取总蛋白,采用双向凝胶电泳(2-DE)技术得到化疗前后凝胶图谱。用ImageMaster5.0分析软件对电泳结果进行数据采集和图像分析,发现化疗前后差异表达的蛋白点;用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDT-TOF-MS)质谱仪进行分析,数据库检索识别差异表达的蛋白点;选取差异蛋白质点,胶内酶解后行肽指纹图分析及网上数据库鉴定,鉴定差异蛋白质。然后采用Western Blot和免疫组织化学方法(10例)进一步验证差异表达的蛋白Peroxiredoxin1和Galectin-1。
结果:建立了宫颈鳞癌化疗前后蛋白差异表达的双向凝胶电泳图谱,发现化疗前后存在3倍以上量差表达的蛋白点共有116个(P<0.05),其中31个差异蛋白点通过质谱分析和数据库的检索得到了初步的鉴定,包括化疗后表达上调的蛋白点有15个,表达下调的蛋白点有16个。同时,我们发现大部分蛋白与肿瘤发生及化疗敏感/耐药相关。
采用Western Blot和免疫组织化学的方法分析Peroxiredoxin1和Galectin-1这两个蛋白,发现:Peroxiredoxin1蛋白在化疗后癌组织的表达显著高于相应化疗前癌组织,而Galectin-1在化疗后癌组织中的表达显著低于相应化疗前癌组织。
结论:
1.运用双向凝胶电泳结合质谱分析的方法可以简单有效的分离出宫颈癌组织化疗前后差异表达的蛋白质,结果可信;
2.筛选到的31个差异表达蛋白质可能与化疗敏感/耐药相关:
3.Peroxiredoxin1和Galectin-1蛋白可能是化疗前预测肿瘤对化疗药物的敏感性的潜在指标。