甲状腺相关眼病(TAO)是目前医学上难以治愈的一种疾病，它有着慢性自身免疫反应的过程，病变累及眶内球后间隙。在病因方面与自身免疫性甲状腺疾病有着密切联系。应用敏感的诊断技术发现大部分Graves病合并有眼征，合并一种或多种甲状腺外病变的患者往往发展为严重的TAO。血清中可测到高浓度的促甲状腺素受体(TSHR)刺激免疫球蛋白，但临床上仍没有明确血清中TSHR抗体与TAO严重程度的关系。如果不把TAO视为独立的疾病，则最适宜将其归于自身免疫性Graves病之列，与其有着共同的发病机制。如果Graves病受累的解剖区域即甲状腺、球后间隙和胫前皮下结缔组织间存在交叉抗原，TSHR将成为最符合逻辑的后选者。为此国内外学者们利用不同的研究方法在甲状腺外区域寻找TSHR存在的证据，所得结果不尽相同，而且缺乏全面、系统的研究。因此，本文将从TAO患者球后脂肪和结缔组织中寻找编码TSHR的mRNA着手，进一步检测TSHR在TAO球后组织中是否有免疫活性蛋白的表达，以验证TSHR蛋白的生理意义。同时进行TAO球后表达的TSHR膜外区基因序列检测，观察有无基因突变发生，确定因此而致分子结构改变而产生免疫原性的可能性。最后，对TAO球后脂肪和结缔组织的超微结构进行研究，寻找病变的根源，为探明TAO发病机制提供新思路。 第一部分TAO和正常人球后脂肪结缔组织中TSHRmRNA表达的研究 目的：寻找在甲状腺外组织TAO患者球后脂肪结缔组织中编码促甲状腺激素受体的mRNA，证实TSHR作为甲状腺和TAO球后脂肪结缔组织的共同抗原而存在于甲状腺外结构中。 方法：选择TAO患者11例，其它眼眶肿瘤患者做对照10例。分别经眼眶减成压术和眶肿瘤切除术获得球后脂肪结缔组织标本，采用异硫氢酸胍一步法提 天津医科大学博士研究生论文取总RNA，经RT－PCR扩增产物电泳观察TSHIb．－－－＊x＊rmA的表达情况。 结果：11例 TAO i者有 9例发现 TSAnll’－＊xrinA的转录，其阳件表达率为引％。］0例正常对照组只有2例检测到mRNA的转录，其阳性表达率为200／o，二者具有统计学差异。 结论：TSHRfnRNA在TAO患者球后脂肪结缔组织中高度表达，提刁。TSHR可能作为交叉抗原在TAO发病机制中起重要作用。 第H部分眼眶脂肪结缔组织中TSHR蛋白表达及其免疫活性 的研究 目的：第一部分实验证实在TAO患者球后组织中检测到TSlllL的转录产物，本部实验进一步检测TAO患者球后组织中是否有TSng蛋白的表达，以明确卜述转录产物是否被翻译成有功能活性和免疫学意义的相关蛋白而发挥生理作用。 方法：由第一部分实验所获得的TAO患者及正常对照组的眼眶球后脂肪结缔组织标本，进行免疫组织化学染色。 结果：9例TA O患者有6例球后脂肪细胞膜呈棕黄色及脂肪间纤维结缔组织有棕黄色颗粒沉着，其 TSLllt蛋白的阳性表达率为 72 72％。而其他 3例 TAO及二例正常对照组的球后脂肪及结缔组织均无TSHR蛋白的表达。 结沦：＊＊Offi者球后脂肪结缔组织切片中有TSHR圭白表达，而【从”个‘4没有表达，可以证实TAO患者球后组织中存在有活性的TSHR蛋白， 第三部分TAO患者TSHR膜外区基因突变的研究 U的：TSFllL被怀疑参与了Graves病等自身免疫性甲状腺疾病的发病，nTAO与Graves甲亢密切相关。为此，本实验欲检测TAO患者球后组织中表达的TSffe膜夕「区基因序列是否存在基因突变，评价其在TA O发病机制中的作旧 方is；运用Trizol试剂一步i去及RT．PCR扩增出完整的TSlllL膜外区基囚＿通过四色荧光标记的Sanger双脱氧核昔三磷酸键末端终止法在全自动DNA序 2 天津医科大学博士研究生沦文列分析仪卜，对2例TAO患者球后组织中表达的TSHR进行序列分析。 结果：2例TAO球后脂肪结缔组织中表达的TSHR膜外区基因序列与Naga｝，ama Y报告的 rsun序列完全一致，均未发现有基因突变。 结论：TS＊R膜外区基因突变可能不是＊＊O的主要致病回素－ 第四部分TAO患者球后脂肪结缔组织超微结构的研究 11们：自V皿察＊AO。牡行球后脂淤Sts组织超微结构的改变，对比研火放厅引起TAO y后组织的变化，评价放］i在治疗TAO中的意义，同时为揭示TAO发病机制提供新思路。 方法：将4例严重TAO患者球后脂肪结缔组织标本及1例放疗后的TAO球后组织和上直肌标本制作成超薄切片，进行透射电镜观察。 结果： ITAO球后脂肪结缔组织电镜改变：前脂肪细胞高度增生，未见成熟的脂肪细胞，成纤维细胞及胶原纤维增生显著。 二 放疗后TAO球后脂肪结缔组织电镜改变：前脂肪细胞萎缩，成纤维细胞变形，细胞器变性，胶原纤维降解。 3 放疗后TA O＄者肌纤维的电镜改变：肌细胞核固缩，肌膜下肌浆问及T谷触合＼扩张，肌原纤纷Ztk紊乱、消?