黄皮核水溶性多糖的分离纯化、结构与抗氧化活性研究

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vancentfcf
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黄皮为华南地区的特产水果,营养丰富,食用和药用价值极高。目前,大部分的黄皮均是进行鲜销和果脯加工,对于副产物的理论研究和深加工较少,比较成熟的研究主要是针对生物碱、黄酮类、酚类等物质的化学性质和生物活性的探讨。黄皮的果核颗粒大、数量多,虽然已作为中药材进行使用,但是对于黄皮果核的深入研究较少。本文以黄皮核为原料,对黄皮核多糖的提取、分离纯化、理化性质、结构鉴定和体外抗氧化活性进行了较为系统的研究,结果表明:将黄皮核粉碎脱脂后,采用水提醇沉法对黄皮核多糖进行提取,粗多糖WCP的得率为8.25%,WCP的糖醛酸含量为40.87%。通过Sevage试剂法进行脱蛋白,蛋白质的脱出率可达到85.31%。将WCP经DEAE-纤维离子交换柱分离和Sephadex G-100凝胶柱层析,得到4个纯化组分。收集第一个和第三个含量较多的两个组分,并命名为WP1和WP3,得率分别为4.81%和2.09%,糖醛酸的含量分别为45.35%和56.79%。在190~400nm范围内连续的紫外扫描可知经过3次脱蛋白后,在280nm处没有吸收峰,且牛血清蛋白法测定的结果显示WP1和WP3均检测不到蛋白质,表明两者均不含蛋白质。通过对WP1和WP3进行碘-碘化钾试剂反应、Molish反应、菲林试剂反应、双缩脲试剂反应和三氯化铁反应,结果显示这两种组分均不含淀粉、蛋白质、核酸以及酚类等物质,有糖醛酸存在的可能。红外光谱分析的结果显示WP1和WP3均含有多糖结构的特征吸收峰。扫描电镜显示了WP1和WP3的表面结构。WP1呈树枝类的条状,与纤维素的结构相似,表面光滑,并伴有凸起的小泡,但表面没有有空洞。WP3表面粗糙,有很多带小泡的褶皱,侧面可以看到很多并排的小孔。采用凝胶渗透色谱(GPC)法测定多糖组分的分子量,得到WP1和WP3的分子量分别为44152Da和48595Da。通过HPLC进行单糖分析,结果可知WP1和WP3中均含有鼠李糖-葡萄糖醛酸-半乳糖醛酸-葡萄糖-半乳糖-阿拉伯糖,对应的摩尔比分别为5.01:1.50:39.53:1:10.76:23.50和5.76:1.73:27.27:1:4.72:8.77。核磁共振分析的结果显示,对于1H NMR而言,WP1和WP3均在3.5~5.5之间有强信号,表示有D-Galp的异头氢和-GalA的存在,13C NMR的结果表明WP1和WP1都有较强的Araf的甲基碳信号、GalpA和Galp甲基碳信号。核磁共振分析的结果和单糖分析的结果均表明了黄皮核多糖中,半乳糖和半乳糖醛酸的含量较高。WP1和WP3的结构差异,导致两者的生物活性不同。通过对WP1和WP3的体外抗氧化活性的测定评价两种组分,包括还原力测定、羟自由基清除率测定、连苯三酚自氧化能力测定和抗氧化能力的测定,以Vc作为阳性对照。结果显示,WP1和WP3的体外抗氧化活性随浓度的增大而增强,且WP3比WP1具有更强的抗氧化活性。
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